[發(fā)明專利]玉郎傘的組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510278816.5
• 申請日: 2015-05-27
• 公開（公告）號: CN104855290B
• 公開（公告）日: 2017-06-16
• 發(fā)明（設計）人: 潘麗梅;白隆華;韋榮昌;馬小軍;馮世鑫;黃芩芬
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙)11369
• 代理人: 靳浩

技術領域

本發(fā)明涉及一種組織培養(yǎng)方法，尤其涉及一種玉郎傘的組織培養(yǎng)方法。

背景技術

玉郎傘是廣西壯族的民間習用藥材，主要分布于廣西、廣東等地，具有補氣、補血、補虛潤肺之功能，民間用于治療營養(yǎng)不良、老年健忘、小兒智力低下，產(chǎn)后虛弱、腰腿痛、風濕痛和慢性肝炎等疾病。服用后能強身健體、消除疲勞，提高免疫力及改善大腦記憶。

目前有關玉郎傘的繁殖、栽培等未見報道，民間多采用野生資源，近年來隨著市場需求的不斷增加，對野生資源的采集量逐漸增大，野生玉郎傘資源瀕臨枯竭。

植物組織培養(yǎng)用的外植體大部分取自田間及野外，表面上附著有大量的微生物，為了獲得無菌外植體，在外植體接種培養(yǎng)前必須進行消毒處理，消毒要求殺滅外植體表面的微生物，同時保證對外植體的損傷盡可能小，盡量做到無損傷。外植體的消毒是植物組織培養(yǎng)中的首要環(huán)節(jié)，也是最重要的環(huán)節(jié)。現(xiàn)有的消毒處理，大多采用雙氧水、次氯酸鈉、抗生素和升汞等進行消毒，存在著消毒效果差，消毒劑殘留，對外植體和人體傷害大，嚴重污染環(huán)境等問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是提供一種外植體的消毒方法，其消毒效果好，對外植體，人體和環(huán)境均沒有傷害，也無試劑殘留。

本發(fā)明還有一個目的是通過玉郎傘的組織培養(yǎng)，提高玉郎傘的繁殖系數(shù)，以滿足市場需求及對野生資源進行保護。

本發(fā)明還有一個目的是提供一種煉苗用的苗床，其具有透氣，防止基質(zhì)積水等作用，為試管苗提供了適宜的生長環(huán)境。

本發(fā)明提供的技術方案為：

一種玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，包括誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其中，所述誘導培養(yǎng)、所述增殖培養(yǎng)、所述壯苗培養(yǎng)和所述生根培養(yǎng)均在固體培養(yǎng)基中進行。

優(yōu)選的是，所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述誘導培養(yǎng)之前還包括獲得無菌外植體的步驟，其中，所述獲得無菌外植體的步驟為：

步驟一、取側(cè)芽作為外植體，用質(zhì)量分數(shù)為1％的洗潔精水溶液浸泡5-10min，浸泡過程中用毛筆輕輕洗刷外植體表面污垢，取出外植體后用自來水沖洗15-30min，再用無菌水潤洗一次，移至超凈工作臺；

步驟二、將所述步驟一中處理后的外植體在體積分數(shù)為75％的酒精中浸泡30-50s后，取出外植體，并將外植體置于無菌水中，之后每隔1-2h向無菌水中通入流量為0.1-0.2m³/min的臭氧-空氣的混合氣體，每次通入6-10min，通入4-6次后，取出外植體，并用無菌水沖洗3-5次，最后用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，得到無菌外植體。

優(yōu)選的是，所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述臭氧-空氣的混合氣體中，所述臭氧的濃度為4-6mg/L。

優(yōu)選的是，所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述誘導培養(yǎng)中，將無菌外植體在溫度為24-26℃，光照強度為1500lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30d，誘導不定芽萌發(fā)，以得到無菌試管苗；

所述誘導培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含：MS，30g·L^-1蔗糖，1.5-2.5mg·L^-16-芐基腺嘌呤和5.0g·L^-1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。

優(yōu)選的是，所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述誘導培養(yǎng)之后進行所述增殖培養(yǎng)，將經(jīng)過所述誘導培養(yǎng)得到的無菌試管苗在溫度為24-26℃，光照強度為2000lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30d，得到大量不定芽；

所述增殖培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含：MS，30g·L^-1蔗糖，0-0.5mg·L^-16-芐基腺嘌呤，0.5-1.5mg·L^-1激動素，0.1-0.5mg·L^-1吲哚乙酸和5.0g·L^-1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。

優(yōu)選的是，所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述增殖培養(yǎng)之后進行所述壯苗培養(yǎng)，將經(jīng)過所述增殖培養(yǎng)得到的不定芽在溫度為24-26℃，光照強度為2000lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)21d，得到健壯植株；

所述壯苗培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含：MS，30g·L^-1蔗糖，0.1-0.5mg·L^-16-芐基腺嘌呤，0.3-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸和5.0g·L^-1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。