[發明專利]玉郎傘的組織培養方法

有效

• 申請號: 201510278816.5
• 申請日: 2015-05-27
• 公開（公告）號: CN104855290B
• 公開（公告）日: 2017-06-16
• 發明（設計）人: 潘麗梅;白隆華;韋榮昌;馬小軍;馮世鑫;黃芩芬
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙)11369
• 代理人: 靳浩

1.一種玉郎傘的組織培養方法，包括獲得無菌外植體、誘導培養、增殖培養、壯苗培養和生根培養，所述誘導培養、所述增殖培養、所述壯苗培養和所述生根培養均在固體培養基中進行；

其中，獲得無菌外植體的具體步驟為：

步驟一、取側芽作為外植體，用質量分數為1％的洗潔精水溶液浸泡5-10min，浸泡過程中用毛筆輕輕洗刷外植體表面污垢，取出外植體后用自來水沖洗15-30min，再用無菌水潤洗一次，移至超凈工作臺；

步驟二、將所述步驟一中處理后的外植體在體積分數為75％的酒精中浸泡30-50s后，取出外植體，并將外植體置于無菌水中，之后每隔1-2h向無菌水中通入流量為0.1-0.2m³/min、臭氧的濃度為4-6mg/L的臭氧-空氣的混合氣體，每次通入6-10min，通入4-6次后，取出外植體，并用無菌水沖洗3-5次，最后用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，得到無菌外植體；

所述誘導培養中，將無菌外植體在溫度為24-26℃，光照強度為1500lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養30d，誘導不定芽萌發，以得到無菌試管苗；

所述誘導培養中的固體培養基由MS，30g·L^-1蔗糖，1.5-2.5mg·L^-1 6-芐基腺嘌呤和5.0g·L^-1瓊脂組成，并調節初始pH值為5.8；

在所述誘導培養之后進行所述增殖培養，將經過所述誘導培養得到的無菌試管苗在溫度為24-26℃，光照強度為2000lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養30d，得到大量不定芽；

所述增殖培養中的固體培養基由MS，30g·L^-1蔗糖，0-0.5mg·L^-1 6-芐基腺嘌呤，0.5-1.5mg·L^-1激動素，0.1-0.5mg·L^-1吲哚乙酸和5.0g·L^-1瓊脂組成，并調節初始pH值為5.8；

在所述增殖培養之后進行所述壯苗培養，將經過所述增殖培養得到的不定芽在溫度為24-26℃，光照強度為2000lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養21d，得到健壯植株；

所述壯苗培養中的固體培養基由MS，30g·L^-1蔗糖，0.1-0.5mg·L^-1 6-芐基腺嘌呤，0.3-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸和5.0g·L^-1瓊脂組成，并調節初始pH值為5.8；

在所述壯苗培養之后進行所述生根培養，將經過所述壯苗培養得到的健壯植株在溫度為24-26℃，光照強度為2000lux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養21d，得到帶根苗，試管苗根長為2-4cm；

所述生根培養中的固體培養基由1/2MS，30g·L^-1蔗糖，0.1-0.5mg·L^-1吲哚乙酸，0-1.0mg·L^-1萘乙酸和5.0g·L^-1瓊脂組成，并調節初始pH值為5.8。

2.如權利要求1所述的玉郎傘的組織培養方法，其中，在所述生根培養之后還包括煉苗移栽的步驟，其中，所述煉苗移栽的步驟為：

步驟a、將經過所述生根培養得到的帶根苗連同培養瓶轉入大棚，在溫度為25-27℃的條件下放置7天，然后打開瓶蓋，在培養瓶中加入自來水，使生根培養的固體培養基全部位于水中，并繼續培養3-4天；

步驟b、設置底部橫截面為長方形的凹字型水泥墩，使得所述水泥墩沿長度方向的兩個高部的豎直高度均比低部高10-12cm，所述水泥墩沿長度方向的兩側外部設置水溝，所述低部沿水泥墩寬度方向設有多個凹槽，所述多個凹槽由中間向兩側直徑逐漸增大，且呈對稱分布的圓臺狀；在所述低部上鋪設濾網，并在所述濾網上從下到上依次鋪設粗石塊層、細砂層，砂石層，以及塘泥、蛭石和椰糠的混合基質層；

步驟c、洗凈所述步驟a中處理后的試管苗的根部的固體培養基，移栽到混合基質層中，移栽后7-10天，在水泥墩上水平鋪設一層遮光率為60-70％的遮陽網，使遮陽網剛好遮住混合基質層，每天噴水1次，保持空氣濕度為85％-90％。

3.如權利要求2所述的玉郎傘的組織培養方法，其中，所述混合基質中塘泥、蛭石和椰糠體積比為3:1:1。

4.如權利要求3所述的玉郎傘的組織培養方法，其中，所述誘導培養、所述增殖培養、所述壯苗培養和所述生根培養均在培養瓶中進行，所述培養瓶的瓶口，瓶蓋及瓶口下1-2cm處的內壁上均涂有光觸媒。