[發明專利]一種合成替度魯肽的方法

有效

• 申請號: 201510274924.5
• 申請日: 2015-05-26
• 公開（公告）號: CN104817638B
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 文永均;郭德文;曾德志;童光彬
• 申請（專利權）人: 成都圣諾生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

1.一種合成替度魯肽的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、His側鏈上偶聯有保護基的多肽片段1；

合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Asp側鏈上偶聯有保護基的多肽片段2；

合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列C端偶聯有樹脂載體、在Ser側鏈上、Asp側鏈上、Glu側鏈上、Asn側鏈上、Thr側鏈上、Arg側鏈上、Trp側鏈上、Gln側鏈上、Lys側鏈上偶聯有保護基的多肽片段3，所述樹脂載體為Trityl-Cl類樹脂或羥基類樹脂；

步驟2、將多肽片段3的N端和多肽片段2的C端偶聯，偶聯后脫除多肽片段2的N端保護基，得到多肽樹脂Ⅰ；

步驟3、將多肽片段1的C端和多肽樹脂Ⅰ的N端偶聯，偶聯后脫除多肽片段1的N端保護基，得到替度魯肽樹脂；

步驟4、替度魯肽樹脂酸解脫除C端樹脂和所有保護基得到替度魯肽粗品，粗品純化轉醋酸鹽，獲得替度魯肽成品，所述酸解采用由體積百分比為80-95％的TFA、體積百分比為1-10％的EDT、余量為水組成的混合酸解液酸解。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟1所述合成多肽片段1具體為：

Fmoc-His(Trt)-OH或Boc-His(Trt)-OH與Gly-OBzl.HCl和三乙胺，在HOSu和DIC的作用下縮合形成Fmoc-His(Trt)-Gly.OBzL或Boc-His(Trt)-Gly.OBzL，然后鈀碳催化氫解，得到Fmoc-His(Trt)-Gly或Boc-His(Trt)-Gly。

3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟1所述合成多肽片段2具體為：

Fmoc-Asp(OtBu)-OH與Gly-OBzl.HCl和三乙胺，在HOSu和DIC的作用下縮合形成Fmoc-Asp(OtBu)-Gly.OBzL，然后鈀碳催化氫解，得到Fmoc-Asp(OtBu)-Gly。

4.根據權利要求2或3所述方法，其特征在于，所述HOSu、DIC、保護氨基酸、三乙胺和Gly-OBzl.HCl的摩爾比為1：1：1：1：1。

5.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟1所述合成多肽片段3具體為：

在偶聯試劑存在下，將Fmoc-Asp(OtBu)-OH與樹脂載體偶聯后脫Fmoc保護基得到H-Asp(OtBu)-樹脂載體，然后采用活化試劑和縮合試劑，按照SEQ ID NO:3所示氨基酸序列C端到N端的順序，依次逐個將剩余氨基酸或保護氨基酸進行延伸偶聯，脫除N端帶有的Fmoc保護基得到多肽片段3，即Ser(tBu)-Phe-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Ile-Leu-Asp(OtBu)-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Asn(Trt)-Trp(Boc)-Leu-Ile-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Ile-Thr(tBu)-Asp(OtBu)-樹脂載體。

6.根據權利要求5所述方法，其特征在于，所述偶聯試劑為N,N-二異丙基乙胺、N,N-二異丙基碳二亞胺/1-羥基苯并三唑/4-N,N-二甲基吡啶兩種之一。

7.根據權利要求5所述方法，其特征在于，所述縮合試劑為N,N-二異丙基碳二亞胺、N,N-二環己基碳二亞胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有機堿、2-(7-氮雜-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有機堿、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽/有機堿、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有機堿中的一種。

8.根據權利要求5所述方法，其特征在于，所述活化試劑為1-羥基苯并三唑或N-羥基-7-氮雜苯并三氮唑。