[發明專利]一種基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法

在審

• 申請號: 201510271764.9
• 申請日: 2015-05-25
• 公開（公告）號: CN104897596A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: 平婧;柳建設;沈忱思;劉娜;婁曉祎;陳名明;于海波
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N21/78
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

技術領域

本發明涉及屬于手性識別、比色分析和環境檢測技術領域，尤其涉及一種檢測S-布洛芬和R-布洛芬的適配體比色檢測方法。

背景技術

手性對映體的存在是自然界的一種普遍現象，作為生命活動重要基礎的生物大分子，如蛋白質、多糖、核酸和酶等，幾乎全是手性的，這些小分子在體內往往具有重要生理功能。手性對映體在吸收、分布、代謝與排泄過程中，通過與體內大分子的不同立體結合，產生不同的藥理作用和反應。在臨床治療方面，服用對映體純的手性藥物不僅可以排除由于無效(不良)對映體所引起的毒副作用，還能減少藥劑量和人體對無效對映體的代謝負擔，對藥物動力學及劑量有更好的控制，提高藥物的專一性具有十分廣闊的市場前景和巨大的經濟價值。因此，手性對映體的分離、分析，對研究生命科學、藥物化學以及人類健康都具有十分重要的意義。目前世界上使用的藥物總數約為1900種手性藥物占50％以上，在臨床常用的200種藥物中，手性藥物多達114種。

近年來，各種手性識別方法得到了發展。最簡單的是旋光度法，但是同一種光學活性化合物的旋光方向會因測定的條件的改變而發生變化，與立體結構之間缺少任何容易分辨的聯系，通過測定旋光度來識別手性化合物就受到了局限。高效液相色譜法、毛細管電泳法等是將分離手段結合光度檢測來實現的，但是往往需要的手性色譜柱價格昂貴、較大的試劑損耗且對分離的條件要求很高，分析時間長不利于快速識別。而光譜分析法和電化學傳感器，靈敏度低和識別過程較為復雜。因此有待發展一種簡單、快速、靈敏的手性識別方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于核酸適體修飾納米金的手性化合物檢測方法，以核酸適體修飾的納米金為手性選擇試劑，利用適體高選擇性和高親和性的特點，使用一段可特異性識別S-布洛芬的單鏈核酸適配體探針(以及可特異性識別R-布洛芬的單鏈核酸適配體探針)分別與金納米粒子結合形成金納米粒子-S-適配體復合探針和金納米粒子-R-適配體復合探針，在有對應的S-布洛芬存在的情況下，S-適配體復合探針與S-布洛芬特異性結合，從而引起金納米粒子表面核酸適配體構象變化，使得金納米粒子對鹽的耐受能力降低從而出現金納米粒子聚沉出現藍色的現象；在有對應的R-布洛芬存在的情況下，S-適配體復合探針不會與R-布洛芬特異性結合，納米金不會在高鹽濃度下聚沉出現藍色現象。同理，在有對應的R-布洛芬存在的情況下，R-適配體復合探針與R-布洛芬特異性結合，引起核酸適配體構象變化，出現金納米粒子聚沉呈藍色的現象。相反在有S-布洛芬存在下R-適配體復合探針復合的納米金粒子不會出現聚沉呈藍色的現象。

為了達到上述目的，本發明提供了一種基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，具體步驟包括：

第一步：制備金納米顆粒溶液；

第二步：制備S-布洛芬適配體和R-布洛芬適配體中的至少一種；

第三步：以S-布洛芬適配體為S-布洛芬的識別探針，將金納米顆粒溶液，S-布洛芬適配體溶液、氯化鈉溶液和S-布洛芬標準溶液混合，定容，得到標準檢測液，反應30min后，根據金納米粒子聚沉引起其溶液變色程度的不同，通過紫外分光光度計檢則檢測體系在650nm和520nm處的吸光值A650和A520，繪制標準曲線；利用該標準曲線檢測待測樣品中的S-布洛芬濃度；或者，以R-布洛芬適配體為R-布洛芬的識別探針，將金納米顆粒溶液，R-布洛芬適配體溶液、氯化鈉溶液和R-布洛芬標準溶液混合，定容，得到標準檢測液，反應30min后，根據金納米粒子聚沉引起其溶液變色程度的不同，通過紫外分光光度計檢則檢測體系在650nm和520nm處的吸光值A650和A520，繪制標準曲線，利用該標準曲線檢測待測樣品中的R-布洛芬濃度。

優選地，所述的S-布洛芬適配體為長度為40bp的單鏈DNA探針，5’端修飾了巰基(-SH)；所述的R-布洛芬適配體為長度為40bp的單鏈DNA探針，5’端修飾了巰基(-SH)。

優選地，所述的S-布洛芬適配體的序列為：

5’-SHACAGCGTGGGCGGTGTCGGATTTTCGTATGGATGGGGATG-3’。

優選地，所述的R-布洛芬適配體的序列為：

5’-SH?GCGAACGACTTCATAAAATGCTATAAGGTTGCCCTCTGTC-3’。