[發明專利]一種基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法

在審

• 申請號: 201510271764.9
• 申請日: 2015-05-25
• 公開（公告）號: CN104897596A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: 平婧;柳建設;沈忱思;劉娜;婁曉祎;陳名明;于海波
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N21/78
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

1.一種基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，具體步驟包括：

第一步：制備金納米顆粒溶液；

第二步：制備S-布洛芬適配體和R-布洛芬適配體中的至少一種，；

第三步：以S-布洛芬適配體為S-布洛芬的識別探針，將金納米顆粒溶液，S-布洛芬適配體溶液、氯化鈉溶液和S-布洛芬標準溶液混合，定容，得到標準檢測液，反應30min后，根據金納米粒子聚沉引起其溶液變色程度的不同，通過紫外分光光度計檢則檢測體系在650nm和520nm處的吸光值A650和A520，繪制標準曲線；利用該標準曲線檢測待測樣品中的S-布洛芬濃度；或者，以R-布洛芬適配體為R-布洛芬的識別探針，將金納米顆粒溶液，R-布洛芬適配體溶液、氯化鈉溶液和R-布洛芬標準溶液混合，定容，得到標準檢測液，反應30min后，根據金納米粒子聚沉引起其溶液變色程度的不同，通過紫外分光光度計檢則檢測體系在650nm和520nm處的吸光值A650和A520，繪制標準曲線，利用該標準曲線檢測待測樣品中的R-布洛芬濃度。

2.如權利要求1所述的基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，所述的S-布洛芬適配體為含有TTGAGCCCT序列、長度為40bp的單鏈DNA探針，5’端修飾了巰基；所述的R-布洛芬適配體為含有TTGAGCCCT序列、長度為40bp的單鏈DNA探針，5’端修飾了巰基。

3.如權利要求1所述的基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，所述的S-布洛芬適配體的序列為：

5’-SHACAGCGTGGGCGGTGTCGGATTTTCGTATGGATGGGGATG-3’。

4.如權利要求1所述的基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，所述的R-布洛芬適配體的序列為：

5’-SH?GCGAACGACTTCATAAAATGCTATAAGGTTGCCCTCTGTC-3’。

5.如權利要求1所述的基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，所述的金納米顆粒溶液的制備方法為：將0.01％(w/v)氯金酸水溶液此溶液在油浴中加熱恒溫于92±4℃，在攪拌條件下，加入1％檸檬酸三鈉溶液，氯金酸與檸檬酸三鈉的摩爾比為1∶300-400，繼續攪拌，至溶液變成清亮透明的橙紅色或紫紅色，得到20-30nmol/L的金納米顆粒溶液。

6.如權利要求5所述的基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，所述的金納米顆粒溶液的制備過程中所用到的玻璃器皿均經過徹底清潔，所述的清潔步驟包括清洗后，用鉻酸洗液或王水充分浸泡24h，后用清水將鉻酸洗液沖洗干凈，最后用超純水沖洗3-4遍，放入烘箱充分干燥，待用。

7.如權利要求1所述的基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，所述的利用該標準曲線檢測待測樣品中的S-布洛芬濃度的具體步驟包括將金納米顆粒溶液，S-布洛芬適配體溶液、氯化鈉溶液和待測樣本混合，定容，得到待測液，反應30min后，通過紫外分光光度計檢則檢測體系在650nm和520nm處的吸光值A650和A520，根據標準曲線計算待測樣本中S-布洛芬的濃度。

8.如權利要求1所述的基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，所述的利用該標準曲線檢測待測樣品中的R-布洛芬濃度的具體步驟包括：將金納米顆粒溶液，R-布洛芬適配體溶液、氯化鈉溶液和待測樣本混合，定容，得到待測液，反應30min后，通過紫外分光光度計檢則檢測體系在650nm和520nm處的吸光值A650和A520，根據標準曲線計算待測樣本中R-布洛芬的濃度。

9.如權利要求1所述的基于核酸適配體修飾納米金的檢測手性化合物的方法，其特征在于，所述的待測樣品含有S-布洛芬和R-布洛芬中的至少一個。