[發明專利]用于培養苯并芘降解菌的培養基及其培育方法

在審

• 申請號: 201510270404.7
• 申請日: 2015-05-26
• 公開（公告）號: CN105039169A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發明（設計）人: 李軍;弓玉紅;白鳳鳳
• 申請（專利權）人: 呂梁學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/77
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.用于培養苯并芘降解菌的培養基，其特征在于，包括富集培養基和2216E培養基，所述富集培養基的原料具體配比為：（NH₄）₂SO₄0.3~0.5g，NaNO₃0.3~0.5g，CaCl₂0.01~0.02g，KH₂PO₄0.5~1.0g，NaH₂PO₄0.5~1.0g，MgSO₄0.1~0.2g，溶解苯并芘5~10mg于丙酮后加水至總體積為1L，pH值7.5；2216E培養基的原料具體配比為：蛋白胨5~8g，酵母浸膏1~2g，磷酸高鐵0.01~0.02g，加水至總體積為1L，pH值7.6～7.8。

2.根據權利要求1所述的用于培養苯并芘降解菌的培養基，其特征在于，所述富集培養基的原料的具體配比為：（NH₄）₂SO₄0.3g，NaNO₃0.3g，CaCl₂0.01g，KH₂PO₄0.5g，NaH₂PO₄0.5g，MgSO₄0.1g，溶解苯并芘5mg于丙酮后加水至1L，pH值7.5；2216E培養基的原料具體配比為：蛋白胨5g，酵母浸膏1g，磷酸高鐵0.01g，加水至1L，pH值7.6。

3.根據權利要求1所述的用于培養苯并芘降解菌的培養基，其特征在于，所述富集培養基的原料具體配比為：（NH₄）₂SO₄0.5g，NaNO₃0.5g，CaCl₂0.02g，KH₂PO₄1.0g，NaH₂PO₄1.0g，MgSO₄0.2g，溶解苯并芘10mg于丙酮后加水至1L，pH值7.5；2216E培養基的原料具體配比為：蛋白胨8g，酵母浸膏2g，磷酸高鐵0.02g，加水至1L，pH值7.8。

4.根據權利要求1所述的用于培養苯并芘降解菌的培養基，其特征在于，所述富集培養基的原料的具體配比為：（NH₄）₂SO₄0.4g，NaNO₃0.4g，CaCl₂0.015g，KH₂PO₄0.8g，NaH₂PO₄0.8g，MgSO₄0.15g，溶解苯并芘8mg于丙酮后加水至1L，pH值7.5；2216E培養基的原料具體配比為：蛋白胨6g，酵母浸膏1.5g，磷酸高鐵0.015g，加水至1L，pH值7.7。

5.用于培養權利要求1所述的苯并芘降解菌的培養方法，其特征在于，具體操作步驟如下：

一、取被苯并芘污染的土樣和水樣的混合物加入到90mL無菌水中，加入適量玻璃珠，振蕩3h；

二、經30min靜置后，取5mL上清液到45mL的無機鹽培養基中，培養基中的苯并芘濃度為1mg/L，培養溫度為28℃，以頻率150r/min搖床避光培養；

三、每隔7天移取10mL菌液至滅菌的90mL無機鹽培養基中富集培養；

四、重復4次，將最后一次的培養液稀釋不同的梯度并涂布于表面涂有苯并芘的選擇性固體培養基平板上培養，在28℃的培養溫度下培養2天；

五、分別挑取單菌落接種到2216E固體平板液體培養基中，反復劃線分離，經28℃培養箱倒置培養2天，得到純培養物，觀察菌落形態并測量菌落大小，記錄并保存菌株。