[發明專利]hTERT重組慢病毒永生化人脫落乳牙牙髓干細胞系的方法

在審

• 申請號: 201510256977.4
• 申請日: 2015-05-19
• 公開（公告）號: CN105063089A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: 李昂;劉瑾;茍建重;尹戰海
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 西安智大知識產權代理事務所 61215
• 代理人: 弋才富

技術領域

本發明屬于細胞工程、基因工程和永生化技術領域，特別涉及hTERT重組慢病毒永生化人脫落乳牙牙髓干細胞系的方法，主要為人脫落乳牙牙髓干細胞系的原代培養和鑒定、通過慢病毒載體感染人端粒酶逆轉錄酶hTERT基因于此細胞構建永生化人脫落乳牙牙髓干細胞系，并對其功能學和轉化性進行檢測。

背景技術

牙周炎的危害越來越受到關注，隨著牙周炎的疾病發展，能夠導致牙周附著喪失、牙槽骨破壞和吸收、牙齒松動甚至牙齒脫落缺失。隨著對牙周疾病研究的進展，人們發現牙周附著再生是牙周炎治療的關鍵也是其最終目標。在過去的幾十年，促進牙周組織再生的策略主要基于基礎治療的抗感染措施，包括齦上潔治術、齦下刮治和根面平整，引導組織再生以及生長因子、支架材料的應用等。但是這些方法在臨床上的應用都具有一定的局限性。組織工程是將細胞和支架材料相負載包裹后植入體內，使其能夠自主修復缺損區域，這就引入了一個新的關于組織再生和重建的理念。而組織工程相關的基因治療近年來也發展迅速，具有極為廣闊的研究前景。

干細胞是一類具有克隆形成能力，并且能夠自我更新和多向分化的細胞。目前研究發現，成體干細胞(adultstemcell，ASC)幾乎已經在所有的機體組織器官中都發現其存在，因其特有的生物學性能及潛在的醫學價值，近年來已經成為最受關注的熱點研究課題之一。ASC在口腔醫學研究中也取得了卓越的成就，為臨床上牙齒再生修復的應用奠定了理論基礎。

間充質干細胞作為成體干細胞中重要的一類，具有能夠分化為神經細胞、脂肪細胞、骨組織、軟骨組織以及相關的間充質細胞等的干細胞特性。更重要的是間充質干細胞有著以下突出的優點：易于從組織中分離獲得和培養，來源豐富廣泛。這就大大擴展了其在組織修復和再生醫學方面的臨床應用的前景。

近年來科學研究發現，口腔組織中也存在著多種多潛能的間充質干細胞。研究學者已經成功的從恒牙、牙周膜、成人牙齒的根尖周上皮以及脫落的乳牙中獲得了多潛能的干細胞，并且具有向骨、軟骨、脂肪、神經等分化的潛能。這些具有多潛能性的細胞能夠再生出牙齒相關特異性結構，如牙本質、牙髓-牙本質復合體、牙骨質等。目前已經發現的口腔組織有關的的間充質干細胞有DPSC、SHED、SCAP和PDLSC等。而牙髓組織是細胞相關的基因治療以及組織工程中最有前途的間充質干細胞的來源。脫落乳牙牙髓干細胞(SHED)主要來源于替牙期的乳牙；DPSC來自于恒牙主要是智齒、正畸牙；MasakoMiura證實SHED能夠誘導宿主細胞形成骨組織，但是BMSeo認為這些細胞在誘導的同時還自身分化為成骨樣細胞，參與骨形成過程。這些結果都提示DPSCs可以作為組織工程的優良種子細胞。