[發(fā)明專利]一種直接實時熒光定量PCR的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201510249614.8 | 申請日： | 2015-05-15 |
| 公開（公告）號： | CN104818338B | 公開（公告）日： | 2018-02-23 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王海濱;周其玲;馮小霞;陳廈;王棽;劉立明;李永利;馬洪濱;王雪飛;高志強;王嫣 | 申請（專利權）人： | 王海濱 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京正理專利代理有限公司11257 | 代理人： | 趙曉丹 |
| 地址： | 100039 北京市豐臺*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 直接 實時 熒光 定量 pcr 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種非診斷目的的直接實時熒光定量PCR的方法，其特征在于包括如下步驟：
1)用熔點為58℃～60℃的石蠟油混合物包被聚苯乙烯微球，并置于PCR擴增管管底；所述石蠟油混合物包括石蠟油和樹脂；
2)混合熱啟動DNA聚合酶、引物和探針、pH值3.5～4.5乙酸緩沖液、氯化鎂、氯化鉀和dNTP即制得熒光PCR擴增試劑；
3)用所述石蠟油混合物封閉所述熒光PCR擴增試劑于步驟1)的PCR擴增管管底；
4)石蠟油混合物冷凝后，加入核酸裂解試劑；
5)檢測樣品。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚苯乙烯微球直徑為1-2mm。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述樹脂為安息香。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述熱啟動DNA聚合酶為熱啟動Taq DNA聚合酶。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述核酸裂解試劑包括0.25N的氫氧化鈉和1％曲通X-100。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：每個PCR管中聚苯乙烯微球的數量為5-25個。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：每個PCR管中聚苯乙烯微球的數量為8-15個。
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