[發明專利]一種納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳的PSA傳感器制備方法及應用

有效

• 申請號: 201510248437.1
• 申請日: 2015-05-16
• 公開（公告）號: CN104865299A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發明（設計）人: 李娜;馬洪敏;魏琴;閆濤;龐雪輝;吳丹;胡麗華;李賀;杜斌
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N33/543
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技術領域

本發明涉及一種花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳生物構建的PSA傳感器制備方法及應用。具體是采用花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳復合材料，制備一種檢測前列腺特異性抗原PSA的生物傳感器，屬于新型功能材料與生物傳感檢測技術領域。

背景技術

電化學免疫傳感器具有選擇性好、靈敏高、檢測限低、操作簡單等優點，可以實現在線電化學檢測，目前已經廣泛用于腫瘤標志物的檢測，因此本發明制備了一種基于花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳生物傳感器實現對前列腺特異性抗原PSA的檢測。

目前由于貴金屬的d電子軌道未填滿，表面容易吸附反應物，且強度適中，利于形成中間“活性化合物”，具有較高的催化活性，同時具有抗氧化、耐腐蝕等優良特性，成為重要的催化劑材料，在傳感器領域得到了廣泛的應用。花狀納米金鈀具有良好的生物相容性和優異的催化活性，同時三氧化二錳對雙氧水也具有良好的催化性能，將花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳復合材料作為前列腺特異性抗原PSA檢測抗體的標記物，可以提高傳感器的靈敏度，達到檢測前列腺特異性抗原PSA的目的，該方法具有成本低、操作簡單、特異性強、檢測快速等特點。

發明內容

?本發明的目的之一是基于花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳生物傳感器的制備。

?本發明的目的之二是將該電化學免疫傳感器應用于前列腺特異性抗原PSA的檢測。

本發明的技術方案

1．一種花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳生物構建的PSA傳感器制備方法

（1）依次用1.0、0.3、0.05?μm的三氧化二鋁拋光粉對玻碳電極拋光處理，用超純水清洗干凈，然后將電極置于5?mmol/L鐵氰化鉀溶液中，在-0.2~0.6?V電位下掃描，使峰電位差小于110?mV；

（2）以質量分數為1%、2?mL的HPtCl₄為底液，在電壓為-0.2V下掃描30s，得到電沉積Pt納米粒子的電極；

（3）滴加6?μL、5~10?μg/mL的前列腺特異性抗原PSA捕獲抗體Ab₁，4℃下晾干，超純水沖洗；

（4）滴加3?μL、質量分數為5~15?mg/mL的牛血清白蛋白溶液至電極表面，4℃下晾干，超純水沖洗；

（5）滴加6?μL濃度為0.0005~20?ng/mL的前列腺特異性抗原PSA溶液至電極表面，4℃下晾干，超純水沖洗；

（6）繼續滴加4~6?μL檢測抗體孵化物—花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳-Ab₂溶液至電極表面，置于4℃冰箱中孵化1?h，清洗后，晾干，制得一種花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳生物構建的PSA傳感器。

2．檢測抗體孵化物—花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳-Ab₂溶液的制備

（1）3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳的制備

將0.5~2.0?g葡萄糖加入到30~80?mL、0.60?mol/L的Mn(NO₃)₂溶液中，10?min后移入到高壓反應釜中，180℃下反應18?h，冷卻至室溫，離心、用乙醇和超純水洗滌，80℃干燥后得到前驅體，隨后550℃下高溫煅燒3?h制得三氧化二錳；

取0.05~1.5?g三氧化二錳置于三口燒瓶中，加入0.1~3?mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷和10?mL無水乙醇，加熱到80℃并保持5~10?h，冷卻到室溫，所得混合物經洗滌、離心分離、45℃下真空干燥，即制得3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳；

（2）花狀納米金鈀的制備

將1?mL含有2~8?mmol/L?HAuCl₄和2~8?mmol/L?K₂PdCl₄的水溶液加到47?mL超純水中，加入0.5~2?mL、0.1?mol/L檸檬酸鈉15?s后，在攪拌下，將0.5~2?mL、5?mg/mL?PVP逐滴加入，攪拌30?min，將混合物離心、洗滌后重新分散到超純水中，制得花狀納米金鈀的溶液；

（3）檢測抗體標記物—花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳的制備