[發(fā)明專利]一種納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳的PSA傳感器制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510248437.1
• 申請日: 2015-05-16
• 公開（公告）號: CN104865299A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李娜;馬洪敏;魏琴;閆濤;龐雪輝;吳丹;胡麗華;李賀;杜斌
• 申請（專利權(quán)）人: 濟南大學(xué)
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N33/543
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1.一種花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳生物構(gòu)建的PSA傳感器制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）依次用1.0、0.3、0.05?μm的三氧化二鋁拋光粉對玻碳電極拋光處理，用超純水清洗干凈，然后將電極置于5?mmol/L鐵氰化鉀溶液中，在-0.2~0.6?V電位下掃描，使峰電位差小于110?mV；

（2）以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%、2?mL的HPtCl₄為底液，在電壓為-0.2V下掃描30s，得到電沉積Pt納米粒子的電極；

（3）滴加6?μL、5~10?μg/mL的前列腺特異性抗原PSA捕獲抗體Ab₁，4℃下晾干，超純水沖洗；

（4）滴加3?μL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5~15?mg/mL的牛血清白蛋白溶液至電極表面，4℃下晾干，超純水沖洗；

（5）滴加6?μL濃度為0.0005~20?ng/mL的前列腺特異性抗原PSA溶液至電極表面，4℃下晾干，超純水沖洗；

（6）繼續(xù)滴加4~6?μL檢測抗體孵化物—花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳-Ab₂溶液至電極表面，置于4℃冰箱中孵化1?h，清洗后，晾干，制得一種花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳生物構(gòu)建的PSA傳感器。

2.如權(quán)利要求1所述的一種花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳生物構(gòu)建的PSA傳感器制備方法，所述檢測抗體孵化物—花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳-Ab₂溶液的制備，其特征在于，包括以下步驟：

（1）3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳的制備

將0.5~2.0?g葡萄糖加入到30~80?mL、0.60?mol/L的Mn(NO₃)₂溶液中，10?min后移入到高壓反應(yīng)釜中，180℃下反應(yīng)18?h，冷卻至室溫，離心、用乙醇和超純水洗滌，80℃干燥后得到前驅(qū)體，隨后550℃下高溫煅燒3?h制得三氧化二錳；

取0.05~1.5?g三氧化二錳置于三口燒瓶中，加入0.1~3?mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷和10?mL無水乙醇，加熱到80℃并保持5~10?h，冷卻到室溫，所得混合物經(jīng)洗滌、離心分離、45℃下真空干燥，即制得3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳；

（2）花狀納米金鈀的制備

將1?mL含有2~8?mmol/L?HAuCl₄和2~8?mmol/L?K₂PdCl₄的水溶液加到47?mL超純水中，加入0.5~2?mL、0.1?mol/L檸檬酸鈉15?s后，在攪拌下，將0.5~2?mL、5?mg/mL?PVP逐滴加入，攪拌30?min，將混合物離心、洗滌后重新分散到超純水中，制得花狀納米金鈀的溶液；

（3）檢測抗體標(biāo)記物—花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳的制備

分別將10~30?mg的3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳分散到5~100?mL的花狀納米金鈀的溶液中，室溫下震蕩12?h；混合物經(jīng)洗滌、離心分離、35℃下真空干燥，制得花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳；

（4）檢測抗體孵化物—花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳-Ab₂溶液的制備

將1~3?mg的花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳分散于1?mL超純水中，加入1?mL、5~12?μg/mL的檢測抗體溶液，在4℃下振蕩孵化12?h，離心分離，將下層沉淀分散于1?mL、1/15?mol/L?的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液中，制得檢測抗體孵化物—花狀納米金鈀/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二錳-Ab₂溶液，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法制備的免疫傳感器用于前列腺特異性抗原PSA的檢測方法，其特征在于，包括以下分析步驟：

（1）采用三電極體系進行測定，將權(quán)利要求1所制備的免疫傳感器作為工作電極，飽和甘汞電極為對電極，鉑絲電極為輔助電極，在pH=7.0的磷酸鹽緩沖溶液中，采用時間-電流的方法進行掃描，輸入電壓為-0.4?V，運行時間400?s；

（2）當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50?s向10?mL、pH=7.0的磷酸鹽緩沖溶液中注入10?μL、5?mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化，根據(jù)所得電流差值與前列腺特異性抗原PSA的濃度成線性關(guān)系，繪制工作曲線；

（3）依據(jù)工作曲線的繪制進行樣品中前列腺特異性抗原PSA的檢測，檢測的結(jié)果可以在工作曲線的查得。