[發明專利]一種高聚集態熒光發射的熒光標記分子及其制備方法

有效

• 申請號: 201510246913.6
• 申請日: 2015-05-15
• 公開（公告）號: CN104830318B
• 公開（公告）日: 2017-04-05
• 發明（設計）人: 呂宏光;高輝;石季;鄭雅丹
• 申請（專利權）人: 天津理工大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C07C255/30;C07C253/30;A61K49/00
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司12002
• 代理人: 侯力

1.一種高聚集態熒光發射的熒光標記分子，其特征在于：化合物名稱為(2Z,2’Z)-3,3’-(2,5-二(二苯胺基)-1,4-苯基)二(2-(3,5-二(三氟甲基)苯基)丙烯腈[(2Z,2’Z)-3,3’-(2,5-bis(diphenylamino)-1,4-phenylene)bis(2-(3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl)acrylonitrile),DPTPA]，分子式為C₅₂H₃₀F₁₂N₄，在波長為365nm的紫外燈照射下發出紅色熒光，該化合物DPTPA的分子結構式為：

2.一種如權利要求1所述高聚集態熒光發射的熒光標記分子的制備方法，其特征在于步驟如下：

1)將1,4-二溴-2,5-二甲醛基苯、3,5-二(三氟甲基)苯與無水乙醇均勻混合，得到混合液；

2)將NaOH溶解于無水乙醇中，得到NaOH-乙醇溶液；

3)在N₂保護下將NaOH-乙醇溶液滴加到混合液中，室溫下攪拌反應1小時，冷卻至室溫后過濾，將所得固體用水、乙醇交替清洗三次，干燥后用氯仿重結晶，得到黃色晶體(2Z,2’Z)-3,3’-(2,5-二溴-1,4-苯基)二(2-(3,5-二(三氟甲基)苯基)丙烯腈；

4)將(2Z,2’Z)-3,3’-(2,5-二溴-1,4-苯基)二(2-(3,5-二(三氟甲基)苯基)丙烯腈、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯、三(二亞芐基丙酮)二鈀、磷酸鉀和二苯胺均勻混合，在N₂保護下逐滴加入甲苯，110℃下回流24小時，得到反應液；

5)將上述反應液倒入水中，反應液與水的體積比為1:10，用氯仿萃取三次，合并萃取液用飽和食鹽水清洗后用無水硫酸鎂干燥，旋轉蒸發后得粗產品；

6)將上述粗產品用體積比為1：1的二氯甲烷-石油醚混合液作洗脫劑柱層析，然后用氯仿重結晶純化，制得紅色晶體狀高聚集態熒光發射的熒光標記分子。

3.根據權利要求2所述高聚集態熒光發射的熒光標記分子的制備方法，其特征在于：所述1,4-二溴-2,5-二甲醛基苯、3,5-二(三氟甲基)苯與無水乙醇的用量比為1.130mmol：2.260mmol：20mL。

4.根據權利要求2所述高聚集態熒光發射的熒光標記分子的制備方法，其特征在于：所述NaOH-乙醇溶液中NaOH與無水乙醇的用量比為16.70mmol：10mL。

5.根據權利要求2所述高聚集態熒光發射的熒光標記分子的制備方法，其特征在于：所述(2Z,2’Z)-3,3’-(2,5-二溴-1,4-苯基)二(2-(3,5-二(三氟甲基)苯基)丙烯腈、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯、三(二亞芐基丙酮)二鈀、磷酸鉀、二苯胺與甲苯的用量比為0.2mmol：0.06mmol：0.03mmol：2mmol：2mmol：1mL。

6.一種如權利要求1所述高聚集態熒光發射的熒光標記分子的應用，其特征在于：將制備的熒光標記分子中的納米粒子在水溶液中用普蘭尼克包覆，在波長大于650nm的近紅外光區標記腫瘤細胞，方法是：

1)將熒光標記分子(DPTPA)和普蘭尼克(F127)溶解于四氫呋喃中形成均一溶液，熒光標記分、普蘭尼克與四氫呋喃的用量比為1mg：20mg：2mL；

2)將上述溶液緩慢逐滴滴加至水中，DPTPA與水的用量比為1mg：5mL，攪拌10-12小時以使四氫呋喃充分揮發，制得熒光納米粒子細胞培養液，其中納米粒子的濃度為4mg/mL；

3)腫瘤細胞熒光成像實驗：

細胞的共聚焦成像實驗在Nikon?A1型熒光共聚焦顯微鏡上進行，選取對數生長期的A549細胞-人體肺腺癌上皮細胞，按每孔接種10000個細胞接種于96孔板中，培養24h，然后吸出培養液，加入熒光納米粒子細胞培養液，并保持每個孔中納米粒子的濃度為40μg/mL，繼續培養12h，最后用新鮮的細胞培養液清洗細胞以除去未標記的納米粒子，在熒光共聚焦顯微鏡下觀察，激發波長為488nm，在大于650nm范圍收集圖像。