[發明專利]轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法

有效

• 申請號: 201510246537.0
• 申請日: 2015-05-14
• 公開（公告）號: CN104897832A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: 陶玉
• 申請（專利權）人: 金花企業(集團)股份有限公司西安金花制藥廠
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 徐文權

1.一種轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)制備供試品溶液；

2)供試品溶液的衍生

精密量取所述供試品溶液2.0mL，并置于具塞試管中；然后向所述具塞試管中加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液0.8～1.0mL以及1mol/L三乙胺乙腈溶液0.4～0.6mL并搖勻，然后于室溫下反應1～2小時，反應結束后用正己烷萃取，取萃取得到的下層溶液用濾膜過濾，收集濾液，得衍生后的供試品溶液；

3)測定

精密量取衍生后的供試品溶液，并注入高效液相色譜儀，以0.05～0.1mol/L醋酸鈉緩沖溶液為流動相A，以甲醇、乙腈和水的混合液為流動相B，利用流動相A與流動相B進行梯度洗脫，記錄色譜圖，根據標準曲線回歸方程求出供試品中游離氨基酸含量，所述梯度洗脫中流動相A與流動相B的體積比為：0min時為97:3，15min時為88:12，20min時為85:15，50min時為50:50，50.1min時為0:100，55min時為0:100，56min時為97:3，70min時為97:3。

2.根據權利要求1所述一種轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述供試品溶液的制備方法為：精密量取固體轉移因子制劑的水溶液、液體轉移因子制劑或轉移因子溶液并置于量瓶中，加水稀釋至刻度后搖勻，得供試品溶液。

3.根據權利要求1所述一種轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述供試品溶液中多肽的質量濃度為0.4～0.6mg/mL。

4.根據權利要求1所述一種轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述高效液相色譜儀的色譜柱填充劑采用十八烷基硅烷鍵合硅膠；所述十八烷基硅烷鍵合硅膠的粒度為5～10μm；所述色譜柱的內徑為2～5mm；所述色譜柱的長度為10～30cm。

5.根據權利要求1所述一種轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述流動相A的pH值為6.0～6.5；所述流動相B中甲醇:乙腈:水的體積比為(15～25):(55～65):(15～25)。

6.根據權利要求1所述一種轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述檢測方法中，檢測波長為210～320nm。

7.根據權利要求1所述一種轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述檢測方法中，進樣量為1～50μL。

8.根據權利要求1所述一種轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述檢測方法中，洗脫流速為0.5～2mL/min。

9.根據權利要求1所述一種轉移因子溶液及其制劑中游離氨基酸含量的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述檢測方法中，柱溫為20～50℃。