[發明專利]一種龍眼肉蛋白多糖的檢測方法

有效

• 申請號: 201510245943.5
• 申請日: 2015-05-14
• 公開（公告）號: CN104865333A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發明（設計）人: 易陽;王宏勛;閔婷;侯溫甫;艾有偉;王麗梅
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 四川君士達律師事務所 51216
• 代理人: 芶忠義

1.一種龍眼肉蛋白多糖的檢測方法，其特征在于，所述的龍眼肉蛋白多糖的檢測方法包括：

步驟一、取龍眼干果肉，加蒸餾水進行勻漿處理，龍眼肉勻漿保溫浸提后，抽濾分離濾液；濾液濃縮后，轉入截留分子量為3500的透析袋中，置于蒸餾水中低溫透析；透析袋內溶液真空濃縮后冷凍干燥，得到龍眼粗蛋白多糖粉末；

步驟二、取龍眼粗蛋白多糖溶于蒸餾水中，充分溶解后離心后取上清液加入Sephadex?G-100凝膠柱中，并以蒸餾水洗脫，采用苯酚硫酸法測定洗脫液中的多糖含量，測定洗脫液在280nm處的吸光值以表征其蛋白含量，收集合并同時出現多糖和蛋白信號的洗脫液，冷凍干燥得到龍眼肉蛋白多糖的純品；

步驟三、取龍眼粗蛋白多糖溶于碳酸鈉緩沖液中，加入異硫氰酸熒光素，于室溫下避光攪拌反應，反應結束后，離心取上清液加入Sephadex?G-100凝膠柱中，并以蒸餾水洗脫，采用苯酚硫酸法測定洗脫液中的多糖含量，并分別測定洗脫液在280nm和489.5nm處的吸光值以表征其蛋白和熒光素含量，收集合并同時出現多糖、蛋白和熒光素信號的洗脫液，冷凍干燥得到熒光標記龍眼肉蛋白多糖的純品；

步驟四、采用硝酸鈉溶液配制系列濃度的熒光標記龍眼肉蛋白多糖樣液，分別經0.45μm微孔濾膜過濾后采用液相色譜儀結合熒光檢測器分析，進行熒光標記龍眼肉蛋白多糖的標準曲線測定；

步驟五、以多糖濃度與峰面積對數對建立標準曲線進行定量分析，以響應峰的保留時間進行分子量的定性分析。

2.如權利要求1所述的龍眼肉蛋白多糖的檢測方法，其特征在于，步驟一所述的龍眼肉勻漿在90℃下保溫浸提2小時。

3.如權利要求1所述的龍眼肉蛋白多糖的檢測方法，其特征在于，步驟一所述的濾液在60℃下真空濃縮后，轉入截留分子量為3500的透析袋中，置于大量4℃蒸餾水中低溫透析12小時。

4.如權利要求1所述的龍眼肉蛋白多糖的檢測方法，其特征在于，在步驟三中，龍眼粗蛋白多糖溶于0.5mol/L的pH為8.3的碳酸鈉緩沖液中，加入異硫氰酸熒光素后于室溫下避光攪拌反應24小時。

5.如權利要求1所述的龍眼肉蛋白多糖的檢測方法，其特征在于，步驟四中采用0.1mol/L的硝酸鈉溶液配制系列濃度為0.5–200μg/mL的多糖樣液。