[發(fā)明專利]采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510243114.3
• 申請(qǐng)日: 2015-05-12
• 公開（公告）號(hào): CN104880519B
• 公開（公告）日: 2016-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳學(xué)松;賴秀梅;溫志芳;陳啟釗;郭振旺;吳嵐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為;蔡國(guó)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動(dòng)物飼料的檢測(cè)領(lǐng)域，特別是一種采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法。

背景技術(shù)

樣品前處理是分析檢測(cè)過(guò)程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是濃縮被測(cè)定的痕量組分，提高方法的靈敏度，及除去對(duì)分析系統(tǒng)有干擾的物質(zhì)的重要手段。萃取是從樣品集體中分離出目標(biāo)化合物的一項(xiàng)技術(shù)，是樣品預(yù)處理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是應(yīng)用最廣泛的樣品制備方法之一，但是，傳統(tǒng)的液液萃取的操作繁瑣費(fèi)時(shí)、有機(jī)溶劑消耗量大，而且容易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象的缺陷，使得在實(shí)際應(yīng)用中具有一定的局限性。

1998年，科學(xué)家提出了在傳統(tǒng)的液液萃取的基礎(chǔ)上，利用一種具有吸附性和較大的比表面積的惰性多空填料作為介質(zhì)，建立的一種新型高效樣品的制備方法-介質(zhì)液液萃取(supported?liquid?extraction簡(jiǎn)稱SLE)，SLE萃取技術(shù)就是選用一種多孔性惰性材料-煅燒硅藻土作為介質(zhì)，取代分液漏斗，增大了兩相接觸時(shí)的作用面積，實(shí)現(xiàn)高效、快速的萃取過(guò)程。

當(dāng)水溶液樣品加樣到固定的聚丙烯注射管中的煅燒硅藻土上后，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間(一般分為幾分鐘)，水相溶液以一層薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，將有機(jī)溶劑從柱管上端加入，當(dāng)互不相溶的兩相在硅藻土表面接觸的同時(shí)萃取立即發(fā)生，最后萃取液在重力作用下流出，必要情況下，可以施加較小的壓力，而水相保留在介質(zhì)中。盛接的流出液直接將溶劑吹干，復(fù)溶后，即可用于下一步分析檢測(cè)。

農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-11-2008公開了豬尿中β-受體激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)，其采用酶解后異丙醇-乙酸乙酯進(jìn)行萃取，并通過(guò)內(nèi)標(biāo)法可以得到相關(guān)的檢測(cè)結(jié)果，但是在實(shí)際應(yīng)用中，采用酶解后然后在采用傳統(tǒng)方法萃取后通過(guò)色譜檢測(cè)有時(shí)無(wú)法檢出殘留項(xiàng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡(jiǎn)單的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法，包括以下步驟：

步驟1：樣品預(yù)處理；收集豬尿，首先加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶進(jìn)行酶解，每毫升的尿液中加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶12μL，酶解結(jié)束后加入三氯乙酸沉淀豬尿中的蛋白質(zhì)，加入4倍豬尿體積的Ph范圍為8.0～10.0的氨水-氯化銨緩沖液，漩渦混合器混合后離心；取離心后的上清液；

步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置2～4分鐘；

步驟3：采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺的洗脫液；

其中，所述的二元洗脫劑為異丙醇和二氧六環(huán)的混合物，其中異丙醇和二氧六環(huán)的重量比為0.8～1:1。

在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法中，所述的豬尿?yàn)?ml，緩沖溶液為4ml，步驟2中所取的上清液為0.5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時(shí)所用的洗脫劑為0.5ml。

在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法中，所述的步驟3中，每次洗脫時(shí)所用的洗脫劑為0.5ml。

在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法中，所述的三氯乙酸和豬尿的質(zhì)量比為1:98～100。

在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法中，所述的步驟1中，漩渦混合器混合處理的時(shí)間為0.5～1.5分鐘。

在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法中，所述的步驟1中，所述的離心處理的具體操作為：將經(jīng)混合處理的溶液在離心機(jī)中以9000～11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心0.5～1.5分鐘。

在上述的采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺的方法中，所述的SLE柱為奧秘山東科技有限公司生產(chǎn)的介質(zhì)液液萃取SLE柱。

本發(fā)明的有益效果如下：

采用SLE法分離豬尿中的萊克多巴胺，先進(jìn)行酶解使蛋白質(zhì)和萊克多巴胺分離，采用緩沖溶液進(jìn)行混合，然后通過(guò)SLE柱分離出萊克多巴胺，萃取劑為異丙醇和二氧六環(huán)，本發(fā)明的分離效率好、分離時(shí)間短，有利于后期的測(cè)量。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。

實(shí)施例1

步驟1：取豬尿1g，首先加入12μLβ-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶進(jìn)行酶解，酶解時(shí)間為3-4小時(shí)，酶解結(jié)束后加入三氯乙酸沉淀豬尿中的蛋白質(zhì)，加入4ml的Ph為9的氨水-氯化銨緩沖液，漩渦混合器混合后離心；取離心后的上清液0.5ml；三氯乙酸和豬尿的質(zhì)量比為1:99。