[發明專利]一種洋蔥活性多肽提取物的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201510242493.4
• 申請日: 2015-05-13
• 公開（公告）號: CN104818311B
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 劉陽;阮金蘭;周涵黎;李麗;馬明蘭;譚珺雋;張琳
• 申請（專利權）人: 武昌理工學院
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C12P21/06;C07K1/16;C07K1/30;A61K38/01;A61K36/8962;A61P3/10;A61P3/06;A23L33/185;A23L33/18
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所42001
• 代理人: 余曉雪

技術領域

本發明涉及中藥提取物的制備技術領域，具體涉及一種洋蔥活性多肽提取物的制備方法及應用。

背景技術

活性肽的制備方法主要有：天然活性肽的分離提取、食品蛋白質水解(包括酸水解、堿水解、酶水解)、化學合成法、基因重組法等。研究表明，在營養蛋白的多肽鏈內部可能普遍存在著功能區，選擇適當的蛋白酶水解這些蛋白，可將活性多肽釋放出來。與酸水解和堿水解相比，酶法水解蛋白具有條件溫和、反應時間短、不產生消旋作用、不破壞氨基酸、產物純度高、易分離、無污染等特點。而化學合成法和基因工程生產活性肽需要相當大的投入，其安全性也要進行研究。因此，酶法水解蛋白是目前制備生物活性肽的主要方法。

洋蔥(Allium cepa L.)別名蔥頭、圓蔥等，百合科、蔥屬二年生草本植物，被譽為“菜中皇后”，食用和藥用價值較高。目前臨床常用糖尿病藥物長期服用會產生耐藥性、抗藥性、肝腎損傷等副作用，同時伴有體重增加、低血糖等不良反應，而生物多肽類藥物具有活性好、療效高、分子量小、副作用少等獨特的優勢，為糖尿病的預防和治療開辟了新的思路。結合現代化學與藥理研究成果，對洋蔥多肽類成分加以開發利用，發掘新藥，將拓寬洋蔥物質資源的應用范圍。

發明內容

針對現有技術中存在的不足，本發明的第一個目的是提供了一種洋蔥活性多肽提取物的制備方法，該方法采用酸溶堿沉獲得洋蔥蛋白，然后通過復合酶酶解、凝膠層析、冷凍干燥等步驟從洋蔥中獲得活性多肽提取物。

本發明的另一個目的是提供了一種上述方法制備的洋蔥活性多肽提取物在制備預防或治療糖尿病、高血脂的藥物、保健食品及食品中的應用。

本發明的第一個目的通過如下技術方案來實現：

一種洋蔥活性多肽提取物的制備方法，步驟如下：

(1)取洋蔥，切丁、勻漿，加入洋蔥重量1-3倍的0.2mol/L pH 5.0-7.0的磷酸鹽緩沖液浸泡，置于4℃冰箱12小時后，冷凍離心，上層即為洋蔥蛋白粗提液；

優選的，所述洋蔥為紫皮洋蔥；

優選的，所述磷酸鹽緩沖液pH為6.0，磷酸鹽緩沖液用量為洋蔥重量的2倍；

優選的，步驟(1)中所述冷凍離心條件為4℃、10000轉/分鐘下離心20分鐘；

(2)向步驟(1)所得洋蔥蛋白粗提液中緩慢加入其1/3-1倍體積的95v/v％乙醇，然后用0.6w/w％NaOH溶液調節pH至8.0，冰浴中靜置過夜后，冷凍離心，收集沉淀，冷凍干燥即得洋蔥蛋白凍干粉；

優選的，所述95v/v％乙醇用量為洋蔥蛋白粗提液體積的0.5倍；

優選的，步驟(2)中所述冷凍離心條件為4℃、10000轉/分鐘下離心20分鐘；

(3)向步驟(2)所得洋蔥蛋白凍干粉中加入6-8倍重量的蒸餾水稀釋，然后用0.1mol/L HCl調節pH至3.5；

優選的，所述蒸餾水用量為洋蔥蛋白凍干粉重量的7倍；

(4)向步驟(3)所得溶液中按酶底比1:(8-12)加入酸性蛋白酶，在55℃下酶解1-3小時，滅酶，冷卻；

步驟(4)中所述酶底比為酸性蛋白酶與步驟(2)所得洋蔥蛋白凍干粉的質量比；

所述酸性蛋白酶的活力為50000u/g；

優選的，所述酶底比為1:10；

優選的，所述酶解時間為2小時；

優選的，所述滅酶條件為95℃、15分鐘；

所述冷卻為冷卻至室溫；

(5)用0.1mol/L HCl調節步驟(4)所得溶液pH至1.5，按酶底比1:(50-70)加入胃蛋白酶，在37℃下酶解1-3小時，滅酶，冷卻，4℃、20000轉/分鐘離心30分鐘，收集上清液；

步驟(5)中所述酶底比為胃蛋白酶與步驟(2)所得洋蔥蛋白凍干粉的質量比；

所述胃蛋白酶的活力為3000u/mg；

優選的，所述酶底比為1:60；

優選的，所述酶解時間為2小時；

優選的，所述滅酶條件為95℃、15分鐘；

所述冷卻為冷卻至室溫；

(6)將步驟(5)收集的上清液用蒸餾水稀釋至為含多肽3-7mg/mL的溶液(命名為“稀釋液”)，用葡聚糖凝膠層析分離，收集分子量3000-1000D的組分，冷凍干燥，即得到洋蔥活性多肽提取物凍干粉。