[發明專利]一種洋蔥活性多肽提取物的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201510242493.4
• 申請日: 2015-05-13
• 公開（公告）號: CN104818311B
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 劉陽;阮金蘭;周涵黎;李麗;馬明蘭;譚珺雋;張琳
• 申請（專利權）人: 武昌理工學院
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C12P21/06;C07K1/16;C07K1/30;A61K38/01;A61K36/8962;A61P3/10;A61P3/06;A23L33/185;A23L33/18
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所42001
• 代理人: 余曉雪

1.一種洋蔥活性多肽提取物的制備方法，步驟如下：

（1）取洋蔥，切丁、勻漿，加入洋蔥重量1-3倍的0.2 mol/L pH 5.0-7.0的磷酸鹽緩沖液浸泡，置于4℃冰箱12小時后，冷凍離心，上層即為洋蔥蛋白粗提液；

（2）向步驟（1）所得洋蔥蛋白粗提液中緩慢加入其1/3-1倍體積的95 v/v %乙醇，然后用0.6 w/w %NaOH溶液調節pH 至8.0，冰浴中靜置過夜后，冷凍離心，收集沉淀，冷凍干燥即得洋蔥蛋白凍干粉；

（3）向步驟（2）所得洋蔥蛋白凍干粉中加入6-8倍重量的蒸餾水稀釋，然后用0.1 mol/L HCl調節pH至3.5；

（4）向步驟（3）所得溶液中按酶底比1:（8-12）加入酸性蛋白酶，在55℃下酶解1-3小時，滅酶，冷卻至室溫；

步驟（4）中所述酶底比為酸性蛋白酶與步驟（2）所得洋蔥蛋白凍干粉的質量比；

所述酸性蛋白酶的活力為50000 u/g；

（5）用0.1 mol/L HCl調節步驟（4）所得溶液pH至1.5，按酶底比1:（50-70）加入胃蛋白酶，在37℃下酶解1-3小時，滅酶，冷卻至室溫，4℃、20000轉/分鐘離心30 分鐘，收集上清液；

步驟（5）中所述酶底比為胃蛋白酶與步驟（2）所得洋蔥蛋白凍干粉的質量比；

所述胃蛋白酶的活力為3000 u/mg；

（6）將步驟（5）收集的上清液用蒸餾水稀釋至為含多肽3-7 mg/mL的溶液，用葡聚糖凝膠層析分離，收集分子量1000-3000 D的組分，冷凍干燥，即得到洋蔥活性多肽提取物凍干粉。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，所述洋蔥為紫皮洋蔥；所述磷酸鹽緩沖液pH為6.0；所述磷酸鹽緩沖液用量為洋蔥重量的2倍。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（2）中，所述95 v/v %乙醇用量為洋蔥蛋白粗提液體積的0.5倍。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，所述蒸餾水用量為洋蔥蛋白凍干粉重量的7倍。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（4）中，所述酶底比為1:10；所述酶解時間為2小時；所述滅酶條件為95℃、15分鐘。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（5）中，所述酶底比為1:60；所述酶解時間為2小時；所述滅酶條件為95℃、15分鐘。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（6）中，將步驟（5）收集的上清液用蒸餾水稀釋至為含多肽5 mg/mL的溶液，葡聚糖凝膠層析的分離條件為：凝膠色譜柱為Superdex Peptide 10/300GL，流動相為0.2 mol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖液，流速0.5 mL/min。

8.根據權利要求1-7中任一所述的制備方法制得的洋蔥活性多肽提取物在制備具有口服降糖和/或降脂作用的藥物中的應用。

9.根據權利要求1-7中任一所述的制備方法制得的洋蔥活性多肽提取物在制備具有口服降糖和/或降脂作用的食品中的應用。

10.根據權利要求1-7中任一所述的制備方法制得的洋蔥活性多肽提取物在制備具有口服降糖和/或降脂作用的保健食品中的應用。