[發明專利]綜合微生物的培養方法

在審

• 申請號: 201510241971.X
• 申請日: 2015-05-13
• 公開（公告）號: CN104893977A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: 辜正隆
• 申請（專利權）人: 江蘇恒豐科技有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C02F11/02;C02F3/30;C09K17/00;C09K101/00
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 郭俊玲

1.一種綜合微生物的培養方法，包括以下步驟：

（1）前期準備：

（A）滅菌處理：分別對實驗操作空間、操作者衣著和手進行清潔和消毒；對培養桶槽和培養皿進行滅菌處理；

（B）制備Biolite水：取大于預定培菌體積的自來水置入干凈桶槽內；在所述桶槽內加入Biolite絲光細粉；于所述桶槽內導入曝氣，曝氣方式為連續曝氣，曝氣時間為不小于24h；曝氣完成后靜置3~5天，并測定水中的金屬離子的含量，直至水中的金屬離子含量為零后待用；

（C）檢查設備和材料：觀察培菌桶槽的外觀是否完整無破損，排水孔洞的蓋子是否旋緊；檢查曝氣設備是否安裝完成，曝氣設備以及其閥門是否正常工作；檢查培菌所需的材料的種類和數量是否正確；

（2）按比例配制培養材料，并將培養材料加入培養桶槽：所述培養材料包括MOLT原生菌液、SOFT生菌粉體、Biolite絲光細粉、光合成菌液GPB、Biolite水和有機營養物；

（3）導入曝氣，進行繁殖培養：將步驟（2）中的培養材料放入培養桶槽，并在培養桶內加入營養物質，所述營養物質包括碳源、氮源、無機鹽類以及水源；培養基的PH值為6~10，培菌室的溫度為0~60℃；曝氣方式為連續曝氣和微曝氣，首先進行連續曝氣，連續曝氣的時間至少為7天；連續曝氣完成后，再進行微曝氣，微曝氣時間至少24h；后續培養的過程中，可以根據菌種繁殖的狀況進行連續曝氣與微曝氣輪換曝氣；從而得到繁殖的MOLT菌液；

（4）取液觀察：

（a）取液：取出所述步驟（3）中得到的繁殖的MOLT菌液，待用；

（b）稀釋菌液：將步驟（a）中所取出的待用的MOLT菌液，分別取出等量的3份，分別加入生理鹽水稀釋為1000倍、10000倍和100000倍，得到三種不同比例的稀釋菌液；

????（c）平板培養：將步驟（b）中的三種不同比例的稀釋菌液用針筒分別取出等量的稀釋菌液放入3個具有培養基的培養皿中，將接種環在酒精燈火焰上灼燒直至燒紅，在酒精燈火焰旁冷卻接種環，將接種環伸入平板內，按“之”字形劃線，使菌液均勻分布，蓋上培養皿蓋，不要劃破培養基；將平板倒置放在培養箱中，培養溫度為30~40℃，培養時間至少為24h；觀察并拍攝照片記錄不同培養時間下的各種菌的菌種和菌相；

（5）分離并檢測：同時將步驟（3）中得到的繁殖的MOLT菌液采用DGGE?電泳設備進行分離并檢測，并分析圖譜；

（6）取液儲存：當觀察發現步驟（3）中的菌液中菌數達到標準后，取出培養桶槽內菌液總重量的6~8%的菌液進行放置保存，然后在按比例添加培養材料至培養桶槽內，使菌液總重量維持不變；同時將曝氣方式改為連續曝氣，連續曝氣時間至少為24h，連續曝氣完成后，再進行微曝氣，并重復步驟（4）和步驟（5），直至觀察發現菌液中菌數達到標準，則重復步驟（6）的上述操作。

2.如權利要求1所述的綜合微生物的培養方法，其特征在于，所述步驟（1）中的（A）步驟的滅菌方法為化學藥劑消毒法，即采用75%的無水乙醇消毒后再采用紫外線消毒法，在紫外線照射下消毒至少1h，以達到滅菌的目的。

3.如權利要求2所述的綜合微生物的培養方法，其特征在于，所述步驟（1）中的（B）步驟中加入Biolite絲光細粉的量為自來水重量的0.5%~0.8%。

4.如權利要求3所述的綜合微生物的培養方法，其特征在于，當培養方式為原代培養時，所述步驟（2）中的培養材料的體積比例為：MOLT原生菌液占總體積的63%~68%，SOFT生菌粉體占總體積的1%~3%，Biolite絲光細粉占總體積的0.05%~0.15%，光合成菌液GPB占總體積的0.5%~1.0%，Biolite水占總體積的30%~35%，有機營養物占總體積的0.5%~1%。

5.如權利要求3所述的綜合微生物的培養方法，其特征在于，當培養方式為分代培養時，所述步驟（2）中的培養材料的體積比例為：MOLT原生菌液占總體積的30%~35%，SOFT生菌粉體占總體積的1%~3%，Biolite絲光細粉占總體積的0.05%~0.15%，光合成菌液GPB占總體積的0.5%~1.0%，Biolite水占總體積的63%~68%，有機營養物占總體積的0.5%~1%。

6.如權利要求4或5所述的綜合微生物的培養方法，其特征在于，所述步驟（4）中的（b）步驟中所取出的等量的3份待用的MOLT原生菌液均為1ml或2ml。