[發明專利]一種B群流行性腦膜炎球菌重組蛋白疫苗及其制備方法有效
| 申請號: | 201510240635.3 | 申請日: | 2015-05-13 |
| 公開(公告)號: | CN104888209B | 公開(公告)日: | 2017-10-20 |
| 發明(設計)人: | 林福玉;魏文進;孟夏萌;任玉瑩;張靜飛;鄭海發 | 申請(專利權)人: | 北京民海生物科技有限公司 |
| 主分類號: | A61K39/095 | 分類號: | A61K39/095;A61P31/04 |
| 代理公司: | 北京路浩知識產權代理有限公司11002 | 代理人: | 王文君,顧筑華 |
| 地址: | 102600 北京市大興區中關*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 流行性 腦膜炎 球菌 重組 蛋白 疫苗 及其 制備 方法 | ||
技術領域
本發明涉及生物制品領域,具體地,涉及一種B群流行性腦膜炎球菌重組蛋白疫苗及其制備方法。
背景技術
腦膜炎奈瑟菌是細菌性腦膜炎和膿毒血癥的主要致病菌,根據腦膜炎球菌菌體表面莢膜多糖結構和抗原性的差異,腦膜炎球菌分為13個血清群(Serogroup),其中5個群(A,B,C,W135和Y群)為主要的致病菌群。全球由腦膜炎球菌引起的腦膜炎發病率每年達30-50萬,其中,約有50%的感染者主要由B群腦膜炎球菌引起。近年來,由于抗生素的濫用,世界各地陸續出現耐藥菌株,這給疾病的治療增加了更大的困難。
人們普遍認為接種安全有效的疫苗是預防和控制流腦的理想措施,腦膜炎球菌各致病血清型之間沒有交叉保護,接種單價疫苗則不能有效預防由其它血清型菌株的感染,目前國外已有A群、C群、A+C群、ACYW135群等多種單價、二價及四價流腦多糖、多糖蛋白結合疫苗上市銷售,在接種人群中已證明是非常安全和有效的。然而,B群腦膜炎球菌表面的莢膜多糖在哺乳動物和人胚胎組織及神經節苷脂中含有類似的結構可能產生交叉反應,所以B群腦膜炎的莢膜多糖不適合用于傳統的腦膜炎球菌多糖疫苗或多糖蛋白結合疫苗的研究開發,尋找合適的非莢膜抗原是開發B群腦膜炎球菌疫苗的關鍵。
人類H結合因子是所有腦膜炎奈瑟菌菌株都表達的一種抗原蛋白,但由于不同菌株表達的HBP氨基酸序列不同,從而交叉免疫反應性有所差異,因此按照HBP差異可分為HBP V1、HBP V2、HBP V3三個變異種。
發明內容
本發明的目的在于提供一種B群流行性腦膜炎球菌重組蛋白疫苗。
本發明的另一目的在于提供制備上述疫苗的方法。
本發明的B群流行性腦膜炎球菌重組蛋白疫苗含有人類H因子結合蛋白三個變異體的重組蛋白,分別為rHBP V1、rHBP V2、rHBP V3。編碼rHBP V1、rHBP V2、rHBP V3重組蛋白的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.1-3所示。
本發明的rHBP V1重組蛋白通過以下方法制備得到:合成rHBP V1基因片段,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,并在該基因的5′端和3′端分別添加Bgl II、Xho I酶切位點,與表達載體連接,導入宿主細胞,篩選得到高效表達rHBP V1的工程菌株MH-rHBP V1,保藏編號為CGMCC NO.10718;將該工程菌株發酵培養,誘導表達重組蛋白,純化、過濾除菌;
本發明的rHBP V2重組蛋白通過以下方法制備得到:合成rHBP V2基因片段,核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,并在該基因的5′端和3′端分別添加Hind III、Xho I酶切位點,與表達載體連接,導入宿主細胞,篩選得到高效表達rHBP V2的工程菌株MH-rHBP V2,保藏編號為CGMCC NO.10719;將該工程菌株發酵培養,誘導表達重組蛋白,純化、過濾除菌;
本發明的rHBP V3重組蛋白通過以下方法制備得到:合成rHBP V3基因片段,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,并在該基因的5′端和3′端分別添加Nde I、Xho I酶切位點,與表達載體連接,導入宿主細胞,篩選得到高效表達rHBP V3的工程菌株MH-rHBP V3,保藏編號為CGMCC NO.10720;將該工程菌株發酵培養,誘導表達重組蛋白,純化、過濾除菌。
本發明提供了上述rHBP V1、rHBP V2、rHBP V3重組蛋白分別在制備預防或治療B群流行性腦膜腦炎誘發的疾病的藥物中的應用。
本發明的實施例中,制備上述三種基因工程菌株時所用的表達載體為pET-22b,3個表達重組蛋白的工程菌株分別命名為MH-rHBP V1、MH-rHBP V2、MH-rHBP V3。
MH-rHBP V1菌株,其保藏編號為CGMCC NO.10718,該菌株已于2015年4月15日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC,地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號,中國科學院微生物研究所,郵編100101),分類命名為大腸埃希氏菌Escherichia coli。
MH-rHBP V2菌株,其保藏編號為CGMCC NO.10719,該菌株已于2015年4月15日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC,地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號,中國科學院微生物研究所,郵編100101),分類命名為大腸埃希氏菌Escherichia coli。
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