[發(fā)明專(zhuān)利]一種B群流行性腦膜炎球菌重組蛋白疫苗及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510240635.3
• 申請(qǐng)日: 2015-05-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104888209B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林福玉;魏文進(jìn);孟夏萌;任玉瑩;張靜飛;鄭海發(fā)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京民海生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K39/095
• 分類(lèi)號(hào): A61K39/095;A61P31/04
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11002
• 代理人: 王文君,顧筑華

1.一種B群流行性腦膜炎球菌重組蛋白疫苗，其特征在于，含有人類(lèi)H因子結(jié)合蛋白三個(gè)變異體的重組蛋白，分別為rHBP V1、rHBP V2、rHBP V3；

其中，編碼rHBP V1、rHBP V2、rHBP V3重組蛋白的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.1-3所示；

其中，

rHBP V1重組蛋白通過(guò)以下方法制備得到：合成rHBP V1基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并在該基因的5′端和3′端分別添加Bgl II、Xho I酶切位點(diǎn)，與表達(dá)載體連接，導(dǎo)入宿主細(xì)胞，篩選得到高效表達(dá)rHBP V1的工程菌株MH-rHBP V1，保藏編號(hào)為CGMCC NO.10718；將該工程菌株發(fā)酵培養(yǎng)，誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白，純化、過(guò)濾除菌；

rHBP V2重組蛋白通過(guò)以下方法制備得到：合成rHBP V2基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，并在該基因的5′端和3′端分別添加Hind III、Xho I酶切位點(diǎn)，與表達(dá)載體連接，導(dǎo)入宿主細(xì)胞，篩選得到高效表達(dá)rHBP V2的工程菌株MH-rHBP V2，保藏編號(hào)為CGMCC NO.10719；將該工程菌株發(fā)酵培養(yǎng)，誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白，純化、過(guò)濾除菌；

rHBP V3重組蛋白通過(guò)以下方法制備得到：合成rHBP V3基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并在該基因的5′端和3′端分別添加Nde I、Xho I酶切位點(diǎn)，與表達(dá)載體連接，導(dǎo)入宿主細(xì)胞，篩選得到高效表達(dá)rHBP V3的工程菌株MH-rHBP V3，保藏編號(hào)為CGMCC NO.10720；將該工程菌株發(fā)酵培養(yǎng)，誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白，純化、過(guò)濾除菌。

2.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述rHBP V1、rHBP V2和rHBP V3重組蛋白的制備過(guò)程中，3個(gè)表達(dá)重組蛋白的工程菌株的發(fā)酵培養(yǎng)為：將工程菌株分別接種于含終濃度為50μg/mL氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)過(guò)夜制備種子液，種子液移入適合大腸桿菌生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基中發(fā)酵：37℃，pH7.0-7.2，200r/min。

3.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述rHBP V1、rHBP V2和rHBP V3重組蛋白的制備過(guò)程中，誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白的方法為：當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)到OD600＝15時(shí)，加入終濃度為0.1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)，誘導(dǎo)溫度為30℃，繼續(xù)培養(yǎng)6～8h后，停止培養(yǎng)，8000rpm，4℃連續(xù)離心20min，收集菌體，用pH7.0、20mmol/L Tris-HCl緩沖液洗滌菌體2遍，勻漿破碎后，12000g，4℃離心30min，棄去沉淀。

4.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于，rHBP V1、rHBP V2、rHBP V3在疫苗中的含量為22.5-27.5μg/ml，調(diào)節(jié)pH至7.0-7.4。

5.如權(quán)利要求4所述的疫苗，其特征在于，rHBP V1、rHBP V2、rHBP V3在疫苗中的含量均為25.0μg/ml，調(diào)節(jié)pH至7.2。

6.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于，還含有佐劑，所述佐劑選自磷酸鋁、氫氧化鋁和MF59中的一種或多種。

7.如權(quán)利要求6所述的疫苗，其特征在于，鋁含量為0.5-1.5mg/ml疫苗。