[發(fā)明專利]一種人嗜鉻蛋白A的免疫測(cè)定法及測(cè)定試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510232661.1
• 申請(qǐng)日: 2015-05-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105004861A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 嘉興行健生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是涉及一種人嗜鉻蛋白A的免疫測(cè)定法及測(cè)定試劑盒。

背景技術(shù)

人嗜鉻粒蛋白A(Chromogranin?A，CgA)是一種由439個(gè)氨基酸組成的酸性可溶性蛋白，為嗜鉻蛋白家族的主要成員。其廣泛存在于神經(jīng)內(nèi)泌細(xì)胞中，血漿中CgA濃度的升高可提示神經(jīng)內(nèi)分泌來(lái)源的腫瘤。神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤起源于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞，典型的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是類(lèi)癌瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、小細(xì)胞肺癌、甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)腺瘤、垂體瘤和胰島瘤，并包括MEN1和MEN2綜合征。這還包括不同的神經(jīng)內(nèi)分泌瘤綜合征，即胃泌素瘤、胰島素瘤、胰高血糖素瘤、生長(zhǎng)抑素瘤、產(chǎn)胰多肽瘤和無(wú)功能性神經(jīng)內(nèi)分泌瘤等。

幾乎所有類(lèi)型的神經(jīng)內(nèi)泌腫瘤的診斷中都會(huì)出現(xiàn)CgA水平的升高，因此，在神經(jīng)內(nèi)泌腫瘤的診斷中，CgA是極具價(jià)值的診斷標(biāo)志物。若以32.7U/L作為臨界值，CgA對(duì)胰腺腫瘤的靈敏度和特異性分別為82.1％和96.2％，對(duì)嗜鉻細(xì)胞瘤的靈敏度和特異性分別為88.5％和96.2％。因此，CgA的定量檢測(cè)對(duì)于胰腺癌及嗜鉻細(xì)胞癌的臨床診斷具有十分重要的意義。

目前，對(duì)CgA的測(cè)定報(bào)道的方法主要有酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)、免疫放射分析法(IRMA)及化學(xué)發(fā)光分析法等。US?4758522的專利中涉及一種基于競(jìng)爭(zhēng)分析法，使用標(biāo)記的CGA和針對(duì)CGA的抗體來(lái)測(cè)量樣品中CGA含量的方法。測(cè)定與抗體結(jié)合或未結(jié)合的標(biāo)記CGA的量作為樣品中CGA的度量。CGA樣品可以得自內(nèi)分泌腺或腎上腺來(lái)源的組織。EP1078266B1的專利中涉及了一種CGA的免疫測(cè)定法，該方法包括將待測(cè)定嗜鉻蛋白A含量的樣品與一組抗體反應(yīng)，其中至少一種(單克隆或多克隆)抗體與CGA氨基酸序列中的第145-234位的表位特異性結(jié)合。更具體地，其中至少一種(單克隆或多克隆)抗體與CGA氨基酸序列中的第145-197位和/或與第219-234位的表位特異性結(jié)合。上述這兩種抗體的任一種都可以在CGA測(cè)定法中與特異性結(jié)合CGA的250-301位序列中表位的抗體相組合。專利號(hào)為CN102869681?A的發(fā)明專利中公開(kāi)了一種嗜鉻粒蛋白A的免疫測(cè)定法，該CGA多肽的測(cè)定方法，主要包括將準(zhǔn)備測(cè)定CGA多肽的存在或CGA多肽的量的樣品與一組單克隆抗體反應(yīng)，其中至少一種單克隆抗體CGA氨基酸序列的第236-251位氨基酸序列表示的CGA多肽中的表位有反應(yīng)性；并且其中至少一種其他單克隆抗體與CGA氨基酸序列的第264-279位氨基酸序列表示的CGA多肽中的表位有反應(yīng)性。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種特異性高、片段存在穩(wěn)定性好、檢測(cè)準(zhǔn)確度高的人嗜鉻蛋白A的免疫測(cè)定方法及測(cè)定試劑盒。

本發(fā)明解決技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：一種人嗜鉻蛋白A的免疫測(cè)定法，所述的免疫測(cè)定法包括將待測(cè)定人嗜鉻蛋白A含量的樣品與一組抗體反應(yīng)；其中至少一種抗體與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第1～113位氨基酸的表位特異性結(jié)合；其中至少一種抗體與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第124～143位氨基酸的表位特異性結(jié)合；其中至少一種抗體與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第322～364位氨基酸的表位特異性結(jié)合；其中至少一種抗體與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第373～439位氨基酸的表位特異性結(jié)合；上述與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第1～113位、第124～143位、第322～364位或第373～439位氨基酸的表位特異性結(jié)合的抗體中，其中至少一種為捕捉抗體；上述與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第1～113位、第124～143位、第322～364位或第373～439位氨基酸的表位特異性結(jié)合的抗體中，其中至少一種抗體為示蹤抗體。

所述的抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。

所述的捕捉抗體為生物素標(biāo)記的抗體或者直接固定于固定相上，所述的固定相為微孔板或磁珠。

所述的測(cè)定方法原理為雙抗體夾心法、免疫比濁法或乳膠增強(qiáng)免疫比濁法。

所述示蹤抗體采用的標(biāo)記方法為酶標(biāo)記法或化學(xué)發(fā)光標(biāo)記法。

一種人嗜鉻蛋白A的測(cè)定試劑盒，所述的測(cè)定試劑盒中包含了上述示蹤抗體和捕捉抗體。

所述的測(cè)定試劑盒主要包括如下組分：嗜鉻蛋白A抗體包被的微孔板、嗜鉻蛋白A示蹤抗體、ELISA濃縮洗滌液、ELISA?HRP基質(zhì)、ELISA終止液、檢測(cè)緩沖液、嗜鉻蛋白A校準(zhǔn)品以及嗜鉻蛋白A質(zhì)控品；所述的嗜鉻蛋白A校準(zhǔn)品和嗜鉻蛋白A質(zhì)控品均為凍干粉狀態(tài)的嗜鉻蛋白A抗原。