[發明專利]一種人嗜鉻蛋白A的免疫測定法及測定試劑盒

在審

• 申請號: 201510232661.1
• 申請日: 2015-05-06
• 公開（公告）號: CN105004861A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發明（設計）人: 高平
• 申請（專利權）人: 嘉興行健生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種人嗜鉻蛋白A的免疫測定法，其特征在于：所述的免疫測定法包括將待測定人嗜鉻蛋白A含量的樣品與一組抗體反應；其中至少一種抗體與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第1～113位氨基酸的表位特異性結合；其中至少一種抗體與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第124～143位氨基酸的表位特異性結合；其中至少一種抗體與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第322～364位氨基酸的表位特異性結合；其中至少一種抗體與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第373～439位氨基酸的表位特異性結合；上述與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第1～113位、第124～143位、第322～364位或第373～439位氨基酸的表位特異性結合的抗體中，其中至少一種為捕捉抗體；上述與人嗜鉻蛋白A氨基酸序列中的第1～113位、第124～143位、第322～364位或第373～439位氨基酸的表位特異性結合的抗體中，其中至少一種抗體為示蹤抗體。

2.根據權利要求1所述的一種人嗜鉻蛋白A的免疫測定法，其特征在于：所述的抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。

3.根據權利要求1所述的一種人嗜鉻蛋白A的免疫測定法，其特征在于：所述的方法原理為雙抗體夾心法、免疫比濁法或乳膠增強免疫比濁法。

4.根據權利要求1所述的一種人嗜鉻蛋白A的免疫測定法，其特征在于：所述的捕捉抗體為生物素標記的抗體或者直接固定于固定相上，所述的固定相為微孔板或磁珠。

5.根據權利要求1所述的一種人嗜鉻蛋白A的免疫測定法，其特征在于：所述示蹤抗體采用的標記方法為酶標記法或化學發光標記法。

6.一種人嗜鉻蛋白A的測定試劑盒，其特征在于：所述的測定試劑盒中包含了上述權利要求1至5中任意一項中所述的示蹤抗體和捕捉抗體。

7.根據權利要求6所述的一種人嗜鉻蛋白A的測定試劑盒，其特征在于：所述的測定試劑盒主要包括如下組分：嗜鉻蛋白A抗體包被的微孔板、嗜鉻蛋白A示蹤抗體、ELISA濃縮洗滌液、ELISA?HRP基質、ELISA終止液、檢測緩沖液、嗜鉻蛋白A校準品以及嗜鉻蛋白A質控品；所述的嗜鉻蛋白A校準品和嗜鉻蛋白A質控品均為凍干粉狀態的嗜鉻蛋白A抗原。

8.根據權利要求7所述的一種人嗜鉻蛋白A的測定試劑盒，其特征在于：所述嗜鉻蛋白A示蹤抗體為辣根過氧化物酶標記的嗜鉻蛋白A抗體；所述ELISA濃縮洗滌液的主要成分為磷酸鹽；所述ELISA?HRP基質的主要成分為3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺；所述ELISA終止液的主要成分為0.5M的硫酸；所述檢測緩沖液的主要成分為磷酸鹽和牛血清白蛋白。

9.根據權利要求7所述的一種人嗜鉻蛋白A的測定試劑盒，其特征在于：所述測定試劑盒的測定方法如下：

(1)添加15μL的校準品、質控品和待測樣本到嗜鉻蛋白A抗體包被的微孔板的指定孔中；

(2)在各孔中分別添加200μL檢測緩沖液；

(3)輕輕混勻，用封板膜密封微孔板，并用錫箔紙避光，在400rpm振動下室溫孵育60分鐘；

(4)移開錫箔紙和封板膜，在洗板機上，用350μL洗滌液將各孔均清洗5次，然后吸干；如有洗滌液殘存，輕輕拍干；

(5)在各孔中添加100μL嗜鉻蛋白A示蹤抗體；

(6)輕輕混勻，用封板膜密封微孔板，并用錫箔紙避光，在400rpm振動下室溫孵育60分鐘；

(7)移開錫箔紙和封板膜，在洗板機上，用350μL洗滌液將各孔均清洗5次，然后吸干；如有洗滌液殘存，輕輕拍干；

(8)在各孔中添加100μL的ELISA?HRP基質；

(9)輕輕混勻，用錫箔紙避光，室溫靜置孵育20分鐘；

(10)移開錫箔紙，在各孔中添加100μL的ELISA終止液，輕輕混勻；

(11)讀取450nm/630nm處的兩個波長光密度值(OD值)；根據樣本的光密度值在標準曲線上的范圍，可直接讀出樣本測定濃度。

10.根據權利要求6所述的一種人嗜鉻蛋白A的測定試劑盒，其特征在于：所述的人嗜鉻蛋白A測定試劑盒用于神經內分泌腫瘤，包括類癌瘤、嗜鉻細胞瘤、神經母細胞瘤、小細胞肺癌、甲狀旁腺機能亢進腺瘤、垂體瘤和胰島瘤，以及MEN1和MEN2綜合征等的輔助診斷、效率評估及動態監測。