[發明專利]一種建立乙醇、HBV雙因素所致肝癌癌前病變小鼠模型的方法

有效

• 申請號: 201510232486.6
• 申請日: 2015-05-08
• 公開（公告）號: CN104904660B
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 唐東昕;楊柱;郭斌
• 申請（專利權）人: 貴陽中醫學院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61K31/045
• 代理公司: 北京聯創佳為專利事務所(普通合伙)11362
• 代理人: 張梅

發明領域

本發明涉及動物模型領域，具體的說，是一種建立乙醇、HBV雙因素所致肝癌癌前病變小鼠模型的方法。

背景技術

肝癌即肝臟惡性腫瘤，可分為原發性和繼發性兩大類。原發性肝臟惡性腫瘤起源于肝臟的上皮或間葉組織，前者稱為原發性肝癌，是我國高發的，危害極大的惡性腫瘤；后者稱為肉瘤，與原發性肝癌相比較較為少見。繼發性或稱轉移性肝癌系指全身多個器官起源的惡性腫瘤侵犯至肝臟。一般多見于胃、膽道、胰腺、結直腸、卵巢、子宮、肺、乳腺等器官惡性腫瘤的肝轉移。

全球大約有3.5億人是乙肝病毒(HBV)的慢性攜帶者，中國更是HBV感染高發區，約7億人感染過HBV，流行病學研究已經證實HBV感染與肝細胞癌(HCC)的發展之間存在著密切相關性。國際衛生組織(WHO)指出：“酒精毒性對肝臟的影響最大，對病毒性肝炎、肝癌等的發生、發展及預后都有重要影響”。如果酗酒的同時又并發肝炎病毒感染，其肝癌發生率可高達50％以上。我們應該認識到至少25％的乙醇性肝病患者同時并發HBV感染及演變為肝癌的高危性。因此，針對HBV感染同時飲酒的肝癌高危人群,建立的乙醇性HBV轉基因小鼠肝癌癌前病變模型，為肝癌癌前病變動物模型的建立探索新的方法，為深入研究肝癌發生發展的分子生物學機制奠定基礎。

目前應用最廣泛的主要都是采用誘發性肝癌癌前病變模型，其中最常用的大多數都是化學、生物致癌因素作用于實驗動物如：2-乙酰氨基芴(2-AAF)；二乙基亞硝胺(DEN)；黃曲霉毒素B1(AFB1)；二甲基氨基偶氮苯(DAB)；四氯化碳(CCL4)等。但是還沒有一種公認的針對酗酒的同時并發肝炎病毒感染誘發的肝癌模型用于實驗研究，如何選擇和研究更為理想的肝癌癌前病變模型則是關鍵所在。

發明內容

本發明的目是提供一種建立乙醇、HBV雙因素所致肝癌癌前病變小鼠模型的方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種建立乙醇、HBV雙因素所致肝癌癌前病變小鼠模型的方法，包括以下步驟：

1)動物：1.3拷貝高復制HBV轉基因小鼠；

2)試劑：白酒；

3)肝癌癌前病變小鼠模型的制備：HBV轉基因小鼠每天給予白酒，連續灌胃16-30周，期間小鼠自由進食、飲水；

4)肝癌癌前病變模型小鼠后期處理：灌胃結束后，分別稱重，取小鼠處死，取肝組織,稱肝重，計算肝臟指數，并進行病理切片觀察。

所述步驟1)中，1.3拷貝高復制HBV轉基因小鼠為6-8周齡，體重23±2g，雄性。

所述步驟3)中，HBV轉基因小鼠灌胃白酒前，先適應性飼養一周以上。

所述步驟3)中，白酒酒精度為53％vol，劑量為10ml·kg^-1，次數為每天一次。

所述步驟3)中，小鼠在灌胃白酒的過程中，需5天稱一次體重，并根據體重變化調整灌胃劑量。

所述步驟3)中，小鼠灌胃白酒的時間為22周。

所述步驟4)中的具體操作方法為：灌胃結束后，分別稱重，將小鼠摘除眼球取血，頸椎脫臼處死小鼠,處死后的小鼠立即取出肝臟，鹽水沖洗后，吸干水分稱重，計算小鼠肝臟指數,然后放入已準備好的4％多聚甲醛固定液瓶中固定、脫水、包埋、切片、HE染色，在400倍光鏡下觀察肝組織病理情況。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

1、本發明動物模型制作簡單，費用低，易重復；

2、本發明22周乙醇誘導的HBV轉基因型小鼠模型組可于鏡下見到肝細胞不典型增生有大細胞性和小細胞性改變，符合肝癌癌前病變模型判斷標準，顯示推斷造模成功。

附圖說明

圖1肝組織病理切片HE染色結果×400，22周酒精模型組。

圖2肝組織病理切片HE染色結果×400，22周空白對照組。

圖3肝組織病理切片HE染色結果×400，16周酒精模型組。

圖4肝組織病理切片HE染色結果×400，16周空白對照組。

具體實施方式

下面結合附圖1-4對本發明提供的具體實施方式作詳細說明。

實施例

1.材料

1.1動物1.3拷貝高復制HBV轉基因小鼠，雄性，6-8周齡，體重23±2g，32只，購自中國人民解放軍第四五八醫院全軍肝病中心，動物合格證號：SCXK(軍)2012-0018。