[發明專利]一種定量分析微量血干血濾紙片上視黃醇及其前體的方法有效
| 申請號： | 201510232220.1 | 申請日： | 2015-05-08 |
| 公開（公告）號： | CN104914176B | 公開（公告）日： | 2018-01-02 |
| 發明（設計）人： | 李廷玉;苗靜琨;鄒琳;余加林;楊亭 | 申請（專利權）人： | 重慶醫科大學附屬兒童醫院 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 重慶弘旭專利代理有限責任公司50209 | 代理人： | 文巍 |
| 地址： | 400014 *** | 國省代碼： | 重慶;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 定量分析 微量 血干血 濾紙 片上視黃醇 及其 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種檢測視黃醇及其前體的方法，包括以下步驟：
（1）從樣品中萃取視黃醇和/或其前體，包括以下步驟：
①血片溶解：將載有微量血的干血濾紙片用打孔器打出直徑3.2mm圓形濾紙血片，置于1.5ml EP管中，加入100μl含0.1% BHT作為抗氧化劑的去離子水，室溫振搖，1000rpm，2min，充分溶解血液；
②蛋白變性：取步驟①所得血斑標本，加入200μl含有0.1% BHT和0.025 mmol/L KOH的甲醇變性沉淀蛋白質，漩渦震蕩2min；
③萃取：以300μl三氯甲烷作為萃取劑加入步驟②所得的溶液中，室溫振搖2min，離心13200 rpm，8min；
④吸取底層的有機溶劑層180μl，氮氣吹干，加入100μl流動相充分溶解，用于HPLC-MS/MS檢測；
（2）HPLC分離視黃醇及其前體；
（3）MS/MS定量檢測。
2.如權利要求1所述的檢測視黃醇及其前體的方法，所述HPLC分離視黃醇及其前體步驟中，采用C8色譜柱，甲醇:CH2CL2=95:5，v/v為流動相，以0.2ml/L等度流速，保持柱溫20℃進行液相分離。
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