[發明專利]一種快速檢測地溝油的時間分辨熒光免疫方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201510228234.6
• 申請日: 2015-05-06
• 公開（公告）號: CN104849251B
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 李軍濤;陳守義;朱偉;楊智聰
• 申請（專利權）人: 廣州市疾病預防控制中心
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

本發明公開了一種快速檢測地溝油的時間分辨熒光免疫方法及試劑盒，本發明方法從地溝油中大量繁殖的細菌種類入手，分析污染地溝油的優勢細菌，再確定其特異成分，來達到鑒別地溝油的目的，研究方法非常獨特，利用地溝油中優勢菌體的脂多糖，篩選單克隆抗體，建立脂多糖的TRFIA檢測方法。本發明所述的方法具有對地溝油特異性強和檢測靈敏度高的優點，在地溝油的鑒別檢測中具有非常重要的意義。

技術領域

本發明涉及食品安全和生化監測領域，特別涉及一種快速檢測地溝油的時間分辨熒光免疫方法及試劑盒。

背景技術

地溝油是質量、衛生極差，過氧化值、酸價、水分、羰基價、丙二醛、AFBI(黃曲霉毒素Aflatoxin Bl(AFBI))等指標嚴重超標的非食用油。餐飲業廢棄油脂中含有大量的有毒有害物質，人類食用后會產生頭暈、惡心、嘔吐、腹瀉、失眠、乏力、消化不良、肝區不適和劇烈腹絞痛等中毒癥狀，長期食用會出現貧血、營養不良，內臟受損，導致人體體重減輕和兒童發育障礙，嚴重者還可能出現中毒性肝病，誘發胃腺癌、腎癌及乳腺、卵巢、小腸等部位癌腫，長期食用對人體健康造成極大危害甚至致癌。有學者對泔水油進行了毒理學研究。研究表明，飼喂泔水油的小白鼠120天后出現死亡現象，到180天死亡率達到60％以上，而對照組的小白鼠沒有出現死亡現象；實驗組中小白鼠行動緩慢，有病狀，肝臟表面有一個黃色脂肪球，肝臟發黃，肝臟細胞變多，呈橢圓形，并有很多細胞處于分裂狀態。地溝油中的重金屬、毒素(如丙烯醛)嚴重超標，過氧化值高于0.4％，遠遠超過國家標準0.15％。長期攝入會使細胞功能衰竭，誘發多種疾病，甚至致癌。日本曾發生食用過氧化值為7.5％的劣質油脂而造成集體急性中毒事件。

我國飲食業發達，是全世界消耗食用油最大的國家。在我國，地溝油的原料獲得比較容易，并且工藝簡單，幾個簡單的設備就可以加工，每年產生至少500萬噸地溝油。由于執法取證困難及違法成本低，在利益的驅動下一些不法投機者將地溝油用在食品中，對社會和食品安全造成非常大的危害。目前國內尚無可靠的檢測地溝油的方法，這使得執法部門無法對市場進行有效的監控。要減少不法投機者將地溝油用在食品中，除提高違法者的違法成本和建立市場準入制度外，還需要建立一套快速鑒別地溝油的檢測系統，為執法者執法時提供技術支持。

目前國內尚未有檢測地溝油的統一標準。現行的國家強制性標準《食用植物油衛生標準》(2716-2005)中，關于食用油的理化指標檢測包括酸價、過氧化值、浸出油溶劑殘留、游離酚(棉籽油)、總砷、鉛、黃曲霉毒素、苯并芘、農藥殘留共9項指標，分別對植物原油和植物食用油進行不同的標準檢測。市場上已經有幾種類型的快速檢測技術或方法，分別為：電導率檢測法、膽固醇檢測法、薄層層析技術等快速檢測方法，這些方法在應用上各有優勢，但都存在缺陷，如下所述：

電導率檢測法：因為油脂在烹飪過程中接觸了洗滌劑、金屬器皿，或長期停留在重金屬環境中，因此地溝油的電導率值明顯高于普通食用油。武漢工業學院曾經找到一種30分鐘內檢測地溝油的方法。通過檢測油的電導率，得出地溝油電導率是一級食用油的5～7倍的結論。這種方法對于“泔水油”的檢測相對有效。然而它的缺陷在于僅僅適用于地溝油添加量在20％以上的食品油檢測；另外只適用于物理壓榨法制備的油品，化學浸出法制備的油品電解質高容易造成假陽性。

膽固醇檢測法：因為地溝油是多種動、植物油脂的混合物，其中動物脂肪中普遍含有膽固醇，而在人們食用的正規植物油中一般不含或只含有極少量的膽固醇。利用這一特性可以鑒別出某些地溝油，但同樣要求地溝油的添加量在10％以上。當有些食用油由于添加了棕櫚油，比較容易在低溫條件下形成結晶造成假陽性。

薄層層析方法：由于地溝油和深度油炸油中含有大部分食用油所不含的醛、酮類極性化合物，在展開劑作用下油樣中的各種成分在硅膠板上擴散分離，經過顯色劑顯色后可觀察到色譜板上不同的薄層斑點，記下原點至主斑點中心及展開劑前沿的距離，計算比移值(RF)。拖尾斑中主要是醛、酮類極性化合物。但是薄層層析法對于一些未經純化的油(比如芝麻油、花椒油等)和加入其他成分的油(如辣椒油)，容易出現假陽性。