[發(fā)明專利]用于檢測除草劑耐受性玉米植物DBN9858的核酸序列及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510219911.8
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104878095B
• 公開（公告）日: 2018-10-26
• 發(fā)明（設計）人: 康越景;郭明欣;劉海利;張成偉;丁德榮;焦國偉;魏雪松;湯波;夏祖靈;熊冠軍;徐亮;鮑曉明
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大北農(nóng)科技集團股份有限公司;北京大北農(nóng)生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;C12N5/10;A01N47/44;A01P7/04;A01G7/06;C12N15/82;C12N15/32;C12N15/54;A01H1/02;A01H6/46
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1.一種核酸序列，其特征在于，包括SEQ ID NO:1或其互補序列、和/或SEQ ID NO:2或其互補序列，所述核酸序列源自轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858，所述轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858以種子的形式且以保藏編號CGMCC No.10212保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸序列，其特征在于，所述核酸序列包括SEQ ID NO:3或其互補序列、和/或SEQ ID NO:4或其互補序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸序列，其特征在于，所述核酸序列包括SEQ ID NO:5或其互補序列。

4.一種檢測樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858的DNA存在的方法，其特征在于，包括：

使待檢測樣品與至少兩種引物在核酸擴增反應中接觸；

進行核酸擴增反應；

檢測擴增產(chǎn)物的存在；

所述擴增產(chǎn)物包括SEQ ID NO:1或其互補序列、和/或SEQ ID NO:2或其互補序列；

所述擴增產(chǎn)物源自轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858，所述轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858以種子的形式且以保藏編號CGMCC No.10212保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述檢測樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858的DNA存在的方法，其特征在于，所述擴增產(chǎn)物還包括SEQ ID NO:6或其互補序列、和/或SEQ ID NO:7或其互補序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述檢測樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858的DNA存在的方法，其特征在于，所述引物包括第一引物和第二引物，所述第一引物選自SEQ ID NO:1或其互補序列、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10；所述第二引物選自SEQ ID NO:2或其互補序列、SEQ IDNO:9和SEQ ID NO:11。

7.一種檢測樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858的DNA存在的方法，其特征在于，包括：

使待檢測樣品與探針接觸，所述探針包括SEQ ID NO:1或其互補序列、或者SEQ ID NO:2或其互補序列，所述探針源自轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858，所述轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858以種子的形式且以保藏編號CGMCC No.10212保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；

使所述待檢測樣品和所述探針在嚴格雜交條件下雜交；

檢測所述待檢測樣品和所述探針的雜交情況。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述檢測樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858的DNA存在的方法，其特征在于，所述探針還具有SEQ ID NO:6或其互補序列、或者SEQ ID NO:7或其互補序列。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述檢測樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858的DNA存在的方法，其特征在于，至少一個所述探針用至少一種熒光基團標記。

10.一種檢測樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858的DNA存在的方法，其特征在于，包括：

使待檢測樣品與標記物核酸分子接觸，所述標記物核酸分子包括SEQ ID NO:1或其互補序列、或者SEQ ID NO:2或其互補序列，所述標記物核酸分子源自轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858，所述轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9858以種子的形式且以保藏編號CGMCC No.10212保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；

使所述待檢測樣品和所述標記物核酸分子在嚴格雜交條件下雜交；

檢測所述待檢測樣品和所述標記物核酸分子的雜交情況，進而通過標記物輔助育種分析以確定草甘膦耐受性和/或草銨膦耐受性與標記物核酸分子在遺傳學上是連鎖的。