[發明專利]人類SLCO1B1和ApoE基因多態性檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201510219089.5
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104846085A
• 公開（公告）日: 2015-08-19
• 發明（設計）人: 張喆;葉婷;張浩;周鵬飛
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京高文律師事務所 11359
• 代理人: 程義貴

技術領域

本發明涉及一種人類SLCO1B1和ApoE基因多態性檢測試劑盒，尤其涉及一種快速有效地檢測少量樣本的SLCO1B1和ApoE基因多態性的試劑盒。

背景技術

他汀類藥物(statins)是三羥基三甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，自從問世以來就成為世界上臨床使用最為廣泛的降脂藥，該類藥物對抑制心腦血管疾病也有顯著作用。他汀類藥物通過競爭性抑制HMG-CoA(三羥基三甲基戊二酰輔酶A)還原酶從而減少膽固醇的生物合成，阻斷細胞內羥甲戊酸代謝途徑，使細胞內膽固醇合成減少，從而反饋性刺激細胞膜表面(主要為肝細胞)低密度脂蛋白受體數量和活性增加、使血清膽固醇清除增加、水平降低，進而達到降低血脂的作用，是目前防治冠心病、腦中風、高血脂、動脈粥樣硬化的首選用藥。

有機陰離子轉運多肽1B1(OATP1B1)參與多種藥物的轉運，在他汀類藥物代謝中負責將血液中的藥物轉移至肝臟中直接發揮藥效或代謝轉化為有活性的物質，由定位在12號染色體上的SLCO1B1基因編碼。研究表明SLCO1B1基因具有遺傳多態性，其中388A>G、521T>C是兩種常見的單核苷酸多態性，可以形成4種單倍型SLCO1B1*1a(388A-521T)、SLCO1B1*1b(388G-521T)、SLCO1B1*5(388A-521C)和SLCO1B1*15(388G-521C)。突變型SLCO1B1基因引起編碼的OATP1B1轉運蛋白活力減弱，表現為肝臟攝取藥物能力降低，引起他汀類藥物血藥濃度上升，增加橫紋肌溶解癥或肌病的發生風險。

載脂蛋白E(ApoE)通過多種途徑參與機體的脂質代謝調節，是影響機體血脂水平的重要內在因素。ApoE多態性被認為是高脂蛋白血癥及動脈粥樣硬化性血管病的易感候選基因。人類ApoE基因定位于19號染色體上，有4個外顯子和3個內含子，主要有兩種單核苷酸多態性526C>T和388T>C，可以形成3種單倍型分別是ApoE3(388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4(388C-526C)。文獻報道，ApoE4攜帶者患冠心病的風險要高40％，并且他汀類藥物對ApoE4攜帶者療效往往不佳或無療效，而對ApoE2攜帶者的降脂作用最強。

表1：SLCO1B1和ApoE基因多態性

目前針對基因多態性的檢測方法很多，如直接測序法，焦磷酸測序法，高分辨率溶解曲線檢測法(High?Resolution?Melting?Analysis，HRM)，熒光定量PCR法等。其中最常見方法為測序法，該方法費用較低，但操作耗時長且靈敏度低；高分辨率溶解曲線法對設備要求比較特殊，在臨床推廣存在一定的困難；傳統熒光定量PCR法在臨床上應用較為廣泛，但該方法檢測基因多態性一般采用Genotyping方法進行檢測，該方法對樣本數量以及多態性分布有一定要求，樣本量少時不能對樣本基因多態性進行準確檢測。因此，需要建立一種快速有效的檢測少量樣本的SLCO1B1和ApoE基因多態性的方法。

發明內容

本發明目的在于，克服現有技術中的不足，提供一種SLCO1B1和ApoE基因多態性的檢測試劑盒，以此解決現有基因多態性檢測技術中，樣本量少時基因多態性檢測效果不理想的問題。本試劑盒可用于高通量、低成本快速檢測SLCO1B1和ApoE基因多態性，其靈敏度高，特異性強，可適用于EDTA、檸檬酸鹽抗凝新鮮全血或血漿中提取的人類基因組DNA的檢測。

本發明提供了一種SLCO1B1和ApoE基因多態性的檢測試劑盒，該試劑盒包括PCR緩沖液，HotStart?Taq酶，UNG酶，4組特異性引物，4組特異性探針和內標系統。

在本發明的一些實施方案中，所述4組特異性引物序列分別為SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3與SEQ?ID?NO:4；SEQ?ID?NO:5與SEQ?ID?NO:6；SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8與SEQ?ID?NO:9；SEQ?ID?NO:10、SEQ?ID?NO:11與SEQ?ID?NO:12。在本發明的一些實施方案中，所述4組特異性探針序列分別為SEQ?ID?NO:13與SEQ?ID?NO:14，SEQ?ID?NO:15與SEQ?ID?NO:16，SEQ?ID?NO:17與SEQ?ID?NO:18，SEQ?ID?NO:19與SEQ?ID?NO:20，且所述特異性探針5’端修飾有FAM或VIC，3’端修飾有NFQ-MGB。