[發明專利]人類SLCO1B1和ApoE基因多態性檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201510219089.5
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104846085A
• 公開（公告）日: 2015-08-19
• 發明（設計）人: 張喆;葉婷;張浩;周鵬飛
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京高文律師事務所 11359
• 代理人: 程義貴

1.一種SLCO1B1和ApoE基因多態性檢測試劑盒，該試劑盒包括PCR緩沖液，HotStart?Taq酶，UNG酶，4組特異性引物，4組特異性探針和內標系統，其中，所述4組特異性引物序列分別為SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3與SEQ?ID?NO:4；SEQ?ID?NO:5與SEQ?ID?NO:6；SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8與SEQ?ID?NO:9；SEQ?ID?NO:10、SEQ?ID?NO:11與SEQ?ID?NO:12。

2.如權利要求1所述的SLCO1B1和ApoE基因多態性檢測試劑盒，其特征在于，所述4組特異性探針序列分別為SEQ?ID?NO:13與SEQ?ID?NO:14，SEQ?ID?NO:15與SEQ?ID?NO:16，SEQ?ID?NO:17與SEQ?ID?NO:18，SEQ?ID?NO:19與SEQ?ID?NO:20，且所述特異性探針5’端修飾有FAM或VIC，3’端修飾有NFQ-MGB。

3.如權利要求1或2所述的SLCO1B1和ApoE基因多態性檢測試劑盒，其特征在于，所述內標系統包含內標引物和內標探針，所述內標引物序列為SEQ?ID?NO:21和SEQ?ID?NO:22,所述內標探針序列為SEQ?ID?NO:23。

4.如權利要求3所述的SLCO1B1和ApoE基因多態性檢測試劑盒，其特征在于，所述內標探針5’端修飾有ROX，3’端修飾有BHQ2。

5.如權利要求1至4任一項所述的SLCO1B1和ApoE基因多態性檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒含有陽性對照液和空白對照液，所述陽性對照液含有7種質粒DNA混合液，所述7種質粒DNA分別含有4種不同的SLCO1B1等位基因和3種不同的ApoE等位基因，所述空白對照為Tris-HCl緩沖液。

6.一種用于檢測SLCO1B1和ApoE基因多態性的方法，該方法包括以下步驟：

(1)設計并篩選含有SLCO1B1和ApoE的檢測探針，ARMS引物，通用引物；

(2)使用從非細胞體系或細胞體系中提取的基因組DNA作為模板DNA；

(3)進行實時熒光定量PCR擴增：每個樣本的SLCO1B1基因多態性和ApoE基因多態性檢測分4管進行PCR反應。

7.一種用于檢測SLCO1B1和ApoE基因多態性的方法，該方法包括以下步驟：

(1)設計并篩選特異性擴增與檢測SLCO1B1和ApoE基因多態性的引物組合和探針組合；制備如權利要求1至5任選一項所述試劑盒；

(2)獲得待測樣品基因組DNA；

(3)進行熒光定量PCR擴增：每個樣本分兩個反應管分別檢測SLCO1B1和ApoE基因的多態性，每管中加入特異性引物組和探針組、PCR反應緩沖液、Taq酶、UNG酶、內標系統，將上述獲得的基因組DNA先后取相同的量加入所述2個反應管中并同時進行PCR反應。