[發明專利]一種北冬蟲夏草的規模化培育方法

有效

• 申請號: 201510217998.5
• 申請日: 2015-05-04
• 公開（公告）號: CN104823714B
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 聶晶石;聶銘喜;凌宏敏;聶曉琳;喬雪
• 申請（專利權）人: 聶晶石
• 主分類號: A01G18/20
• 分類號: A01G18/20;A01G18/40;C05G3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種北冬蟲夏草的規模化培育方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1 北冬蟲夏草一級、二級母種斜面培養

步驟1.1 配置培養基，培養基配方為：土豆200g、瓊脂20g、柞蠶蛹100g、葡萄糖20g、蛋白胨8g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.75g，1000毫升水；

步驟1.2 采集野生北冬蟲夏草用質量濃度0.1％的汞溶液消毒，無菌水清洗，取其內部組織1立方毫米的小塊移接至培養基斜面，放入20℃的恒溫箱中培養15天即得北冬蟲夏草一級母種斜面；

步驟1.3 選擇僵化率高、出草整齊的一級母種斜面試管再進行擴大培養，得二級母種斜面；

步驟2 北冬蟲夏草液體菌種的制作與培養

步驟2.1 配置培養基，按質量分數培養基配方為：活柞蠶蛹10％、葡萄糖1％、蛋白胨1％、速溶奶粉1％、磷酸二氫鉀0.15％，硫酸鎂0.075g，1000ml水，1只雞蛋清；

步驟2.2 接種二級母種，在21℃恒溫箱內靜止培養24h后，用150r/min往復式搖床進行振蕩培養96h后，選取合格菌種；

步驟3 注射接種

選取蠶蛹在發酵終了前1d進行注射接種，注入菌種0.08～0.15ml，送發菌室內發菌；

步驟4 菌絲培養

步驟4.1 低溫避光環境下培養，溫度前3d控制為16℃，3d～8d控制為18℃，濕度60％以上；

步驟4.2 將僵化好的蠶蛹21～22℃避光條件下培養，促使菌絲后熟，轉向生殖生長階段；

步驟5 誘導原基形成與出草管理

步驟5.1 將生殖生長階段的僵蛹的三分之一處劃刀口，劃口后的僵蛹不立即見光，在溫度21～22℃，濕度80％以上的暗室培養中3天，待僵蛹的環節及劃口處長出白色菌絲，再裝瓶見光出草；

步驟5.2 將菌絲營養生長結束的蠶蛹，用2g/L臭氧水蛹體表面消毒10min，控凈表面自由水后在無菌室上瓶，送到出草室培養出草；

步驟5.3 待原基形成后溫度控制在19～22℃，蛹蟲草長到1cm高時，將室內的相對濕度調高至75％～80％，經過15～17d，蛹蟲草生長高度接近瓶口即可采收。

2.根據權利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規模化培育方法，其特征在于：步驟1.1所述的培養基通過以下方法制備：將土豆塊和柞蠶蛹加水煮沸至土豆軟而不爛時，濾去土豆殘渣，在汁液中加入剩余組分并攪拌均勻，加熱至瓊脂完全溶化后分裝試管，培養基的量與試管的體積比是1∶5，高壓鍋滅菌，加熱到壓力達到0.5Kg/m²時，排出冷空氣，然后繼續加熱至125℃時保壓35分鐘后停止加熱降溫，排氣，并趁熱把試管擺成斜面，得固體試管斜面備用。

3.根據權利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規模化培育方法，其特征在于：步驟2.1所述的培養基通過以下方法制備：將活蠶蛹手撕開放入1000ml冷水中，沸煮25min，收集濾液，開水定溶1000ml，依次加入硫酸鎂、磷酸二氫鉀、蛋白胨和奶粉，充分溶解后，冷卻至30℃，加入泡沫雞蛋清，充分攪拌均勻，高壓滅菌器，在0.137Mpa、125℃條件下滅菌20min，濾出澄清液，加入葡萄糖攪拌溶解后滅菌。

4.根據權利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規模化培育方法，其特征在于：步驟2.2所述的合格菌種標準為：菌液澄清不混濁，菌球多，形狀一致，發育齊一，晃動后浮起的菌球5min不下沉，經顯微鏡檢查，無和蟲草菌絲不一樣的微生物。

5.根據權利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規模化培育方法，其特征在于：步驟3所述的發菌室在使用前3d用3％甲醛進行消毒，室外過道用1％消特靈水洗刷封閉地面，發菌室的門窗用黑紅布窗簾遮擋。

6.根據權利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規模化培育方法，其特征在于：所述的生殖生長的標志為：菌齡達15～17d；蛹體和環節間膜處長出白色菌絲；蛹頂由白色變成淡褐色。