[發(fā)明專利]一種北冬蟲夏草的規(guī)模化培育方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510217998.5
• 申請(qǐng)日: 2015-05-04
• 公開（公告）號(hào): CN104823714B
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 聶晶石;聶銘喜;凌宏敏;聶曉琳;喬雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 聶晶石
• 主分類號(hào): A01G18/20
• 分類號(hào): A01G18/20;A01G18/40;C05G3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種北冬蟲夏草的規(guī)模化培育方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1 北冬蟲夏草一級(jí)、二級(jí)母種斜面培養(yǎng)

步驟1.1 配置培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方為：土豆200g、瓊脂20g、柞蠶蛹100g、葡萄糖20g、蛋白胨8g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.75g，1000毫升水；

步驟1.2 采集野生北冬蟲夏草用質(zhì)量濃度0.1％的汞溶液消毒，無菌水清洗，取其內(nèi)部組織1立方毫米的小塊移接至培養(yǎng)基斜面，放入20℃的恒溫箱中培養(yǎng)15天即得北冬蟲夏草一級(jí)母種斜面；

步驟1.3 選擇僵化率高、出草整齊的一級(jí)母種斜面試管再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，得二級(jí)母種斜面；

步驟2 北冬蟲夏草液體菌種的制作與培養(yǎng)

步驟2.1 配置培養(yǎng)基，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)培養(yǎng)基配方為：活柞蠶蛹10％、葡萄糖1％、蛋白胨1％、速溶奶粉1％、磷酸二氫鉀0.15％，硫酸鎂0.075g，1000ml水，1只雞蛋清；

步驟2.2 接種二級(jí)母種，在21℃恒溫箱內(nèi)靜止培養(yǎng)24h后，用150r/min往復(fù)式搖床進(jìn)行振蕩培養(yǎng)96h后，選取合格菌種；

步驟3 注射接種

選取蠶蛹在發(fā)酵終了前1d進(jìn)行注射接種，注入菌種0.08～0.15ml，送發(fā)菌室內(nèi)發(fā)菌；

步驟4 菌絲培養(yǎng)

步驟4.1 低溫避光環(huán)境下培養(yǎng)，溫度前3d控制為16℃，3d～8d控制為18℃，濕度60％以上；

步驟4.2 將僵化好的蠶蛹21～22℃避光條件下培養(yǎng)，促使菌絲后熟，轉(zhuǎn)向生殖生長(zhǎng)階段；

步驟5 誘導(dǎo)原基形成與出草管理

步驟5.1 將生殖生長(zhǎng)階段的僵蛹的三分之一處劃刀口，劃口后的僵蛹不立即見光，在溫度21～22℃，濕度80％以上的暗室培養(yǎng)中3天，待僵蛹的環(huán)節(jié)及劃口處長(zhǎng)出白色菌絲，再裝瓶見光出草；

步驟5.2 將菌絲營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)結(jié)束的蠶蛹，用2g/L臭氧水蛹體表面消毒10min，控凈表面自由水后在無菌室上瓶，送到出草室培養(yǎng)出草；

步驟5.3 待原基形成后溫度控制在19～22℃，蛹蟲草長(zhǎng)到1cm高時(shí)，將室內(nèi)的相對(duì)濕度調(diào)高至75％～80％，經(jīng)過15～17d，蛹蟲草生長(zhǎng)高度接近瓶口即可采收。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規(guī)模化培育方法，其特征在于：步驟1.1所述的培養(yǎng)基通過以下方法制備：將土豆塊和柞蠶蛹加水煮沸至土豆軟而不爛時(shí)，濾去土豆殘?jiān)谥褐屑尤胧Ｓ嘟M分并攪拌均勻，加熱至瓊脂完全溶化后分裝試管，培養(yǎng)基的量與試管的體積比是1∶5，高壓鍋滅菌，加熱到壓力達(dá)到0.5Kg/m²時(shí)，排出冷空氣，然后繼續(xù)加熱至125℃時(shí)保壓35分鐘后停止加熱降溫，排氣，并趁熱把試管擺成斜面，得固體試管斜面?zhèn)溆谩?/p>

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規(guī)模化培育方法，其特征在于：步驟2.1所述的培養(yǎng)基通過以下方法制備：將活蠶蛹手撕開放入1000ml冷水中，沸煮25min，收集濾液，開水定溶1000ml，依次加入硫酸鎂、磷酸二氫鉀、蛋白胨和奶粉，充分溶解后，冷卻至30℃，加入泡沫雞蛋清，充分?jǐn)嚢杈鶆颍邏簻缇鳎?.137Mpa、125℃條件下滅菌20min，濾出澄清液，加入葡萄糖攪拌溶解后滅菌。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規(guī)模化培育方法，其特征在于：步驟2.2所述的合格菌種標(biāo)準(zhǔn)為：菌液澄清不混濁，菌球多，形狀一致，發(fā)育齊一，晃動(dòng)后浮起的菌球5min不下沉，經(jīng)顯微鏡檢查，無和蟲草菌絲不一樣的微生物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規(guī)模化培育方法，其特征在于：步驟3所述的發(fā)菌室在使用前3d用3％甲醛進(jìn)行消毒，室外過道用1％消特靈水洗刷封閉地面，發(fā)菌室的門窗用黑紅布窗簾遮擋。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北冬蟲夏草的規(guī)模化培育方法，其特征在于：所述的生殖生長(zhǎng)的標(biāo)志為：菌齡達(dá)15～17d；蛹體和環(huán)節(jié)間膜處長(zhǎng)出白色菌絲；蛹頂由白色變成淡褐色。