[發明專利]一種乳制品中乳清蛋白成分的快速分離檢測方法

有效

• 申請號: 201510217875.1
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104777257B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 袁曉;戴智勇;莫紅衛;潘麗娜;張巖春
• 申請（專利權）人: 澳優乳業（中國）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 長沙七源專利代理事務所(普通合伙)43214
• 代理人: 歐穎,鄭雋

技術領域

本發明涉及一種乳制品中乳清蛋白成分的檢測方法，尤其是涉及一種嬰幼兒乳制品中乳清蛋白成分的快速檢測方法。

背景技術

乳清蛋白是一些小的、緊密的球狀蛋白，其獨特的氨基酸序列和三維結構賦予它廣泛的功能特性，其必需氨基酸組成完全符合或超出FAO/WHO的要求。它的膽固醇、脂肪和乳糖含量低，易消化，易吸收。與其它蛋白質比較，具有最高的生物利用價值。生產工藝可影響乳清蛋白的功效，低溫、膜超濾技術提取的未變性乳清蛋白的活性和功效最佳。

乳清蛋白的功能性成分包括：β-乳球蛋白占48％，α-乳清蛋白占19％左右，牛血清白蛋白占5％，免疫球蛋白(IgG)占8％，還含有乳鐵蛋白、乳過氧化酶、生長因子和許多生物活性因子及酶，這些物質均具有一定的生物活性。乳清蛋白中必需氨基酸種類齊全，組成模式與人體相似，容易消化吸收，因而具有極高的生物利用效價。

牛乳中乳清蛋白和酪蛋白的比例約為20∶80，而人乳中這一比例超過60∶40，GB10765《食品安全國家標準嬰幼兒食品》中規定乳基嬰兒配方食品的蛋白質中乳清蛋白含量應≥60％。因此以牛乳為主要原料生產嬰兒配方奶粉時，就要對乳清蛋白和酪蛋白的比例進行調整。但是世界各國尚沒有乳清蛋白的權威檢測方法和固定的檢測標準。我國的嬰幼兒食品國家標準中雖然把乳清蛋白列為檢測項目，但現行國家標準GB?5413.2-1997是引進了日本森永公司的檢測方法，只能測定乳清蛋白和酪蛋白的比例，且檢測結果與實際含量誤差較大、測定時間長、重現性差。使用液相色譜-質譜聯用法和特異性肽段檢測法檢測乳制品中乳清蛋白的含量也有報道，如專利CN200910161153.3中提供一種分離和測定牛乳清蛋白的方法，它包括對乳清蛋白進行預處理、用以1.7μm亞乙基橋雜化顆粒為填料的超高效液相色譜柱將試樣中的牛乳α-乳清蛋白和牛乳βa-乳球蛋白、牛乳βb-乳球蛋白完全分離和用質譜儀進行區間掃描，對未變性的上述牛乳白蛋白和牛乳球蛋白進行定量。在該方法中，添加人α-乳清蛋白作為內標。使用該方法，可以準確測定各種食品中的未變性的上述三種牛乳清蛋白的含量。但是奶制品尤其是奶粉經過較高加工溫度，各種蛋白質存在不同程度的變性，這些變性后的蛋白質無法用該方法檢測。同時該專利方法需要配備質譜儀等昂貴設備，而且存在樣品前處理時間長、檢測成本高等缺點。

另有專利CN201110283264中公開一種超高效液相色譜測定奶粉和牛奶中牛乳清蛋白含量的方法，包括在待測的奶粉和牛奶中加入含TritonX-100的鹽酸提取液、超聲溶解，用乙酸鈉水溶液調整pH在4.4-4.6之間，用水定容、均質，室溫靜置后過濾，濾液通過濾膜，上ACQUITY?UPLC?BEH300C18色譜柱，采用ACQUITYUPLC-TUV超高效液相色譜系統測定奶粉和牛奶中Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg三種牛乳清蛋白的含量。運用相對簡單高效的純化步驟進行操作，實現Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg，的分離，保證了定量精度，并有效去除酪蛋白質和脂類等雜質干擾，提高了最終檢測的靈敏度。方法的檢出限為1μg/g。該方法中使用的ACQUITYUPLCBEH300C18色譜柱為亞乙基橋雜化顆粒(BEH)填充的硅烷基柱。但該方法中僅能檢測α-乳清蛋白和兩種β-乳球蛋白共三種牛乳清蛋白，因而其所得的乳制品中乳清蛋白含量的準確度有限，且該方法中并未公開分離和檢測牛血清白蛋白和牛乳IgG等活性組分的方法。

而專利申請CN201410722848中公開一種測定乳基嬰幼兒配方粉中乳清蛋白含量的方法，所述方法包括以下的步驟：①待檢樣品上樣液的制備；②酪蛋白標準品和乳清蛋白標準品上樣液的制備；③聚丙烯酰胺凝膠電泳；④染色與脫色；⑤成像與計算。所述的方法準確性高、操作簡單、成本低。但該方法中只能計算乳清蛋白和酪蛋白中含量較高的成分，對于乳清蛋白中微量活性成分如乳鐵蛋白、免疫球蛋白(牛乳IgG)等無法分離和測定。

因此研究一種準確、快速、低耗的乳制品中乳清蛋白成分，特別是嬰幼兒奶粉中乳清蛋白成分的檢測方法具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種適用于乳制品中的乳清蛋白快速檢測方法。