[發明專利]一種乳制品中乳清蛋白成分的快速分離檢測方法

有效

• 申請號: 201510217875.1
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104777257B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 袁曉;戴智勇;莫紅衛;潘麗娜;張巖春
• 申請（專利權）人: 澳優乳業（中國）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 長沙七源專利代理事務所(普通合伙)43214
• 代理人: 歐穎,鄭雋

1.一種乳制品中乳清蛋白成分的快速分離檢測方法，包括如下步驟，

步驟A，配制標準溶液或解凍標準溶液：稱取牛乳IgG標準品、α-乳清蛋白標準品、牛血清白蛋白標準品和β-乳球蛋白標準品溶解于pH值為7.2～8.0的磷酸鹽緩沖液中制得標準溶液，其中牛乳IgG標準品、α-乳清蛋白標準品、牛血清白蛋白標準品和β-乳球蛋白標準品在磷酸鹽緩沖液中的重量濃度分別為0.002～0.01％、0.005～0.02％、0.005～0.02％和0.01～0.04％；或者取配制時間在3個月以內且儲藏在－25℃～－18℃環境下的所述標準溶液解凍；

步驟B，配制待測樣品溶液：使用pH值為7.2～8.0的磷酸鹽緩沖液稀釋待測樣品至其中蛋白質含量≤x％，待測樣品中本身蛋白質含量≤x％時不需稀釋，且0.075≤x≤0.125；

步驟C，HPLC分離和檢測：使用凝膠色譜柱分離所述標準溶液和待測樣品溶液，其中HPLC的流動相為乙腈、水和三氟乙酸的混合液；且使用紫外光譜儀或二極管陣列檢測器檢測并計算得到乳制品中乳清蛋白組分牛乳IgG、α-乳清蛋白、牛血清白蛋白和β-乳球蛋白的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準溶液中牛乳IgG標準品、α-乳清蛋白標準品、牛血清白蛋白標準品和β-乳球蛋白標準品的濃度分別為0.005％、0.01％、0.01％和0.02％。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準溶液中還包括溶解于磷酸鹽緩沖液中的乳鐵蛋白標準品，且其中乳鐵蛋白標準品的重量濃度為0.0001～0.001％，優選為0.0005％，且所述乳鐵蛋白標準品中乳鐵蛋白的含量為＞90％。

4.根據權利要求1～3中任意一項所述的方法，其特征在于，在步驟C之前還包括對所述標準溶液和待測樣品溶液使用含孔徑為0.22μm膜的過濾器過濾。

5.根據權利要求1～3中任意一項所述的方法，其特征在于，步驟C中使用的色譜柱包括兩根串聯的TSK?G3000PW_Xl凝膠柱和一根預柱PW_Xl，優選所述預柱的直徑為6mm且長度為4cm。

6.根據權利要求1～3中任意一項所述的方法，其特征在于，用于配制標準溶液的標準品中牛乳IgG、α-乳清蛋白、牛血清白蛋白和β-乳球蛋白的含量分別為＞90％、＞95％、＞90％和＞90％。

7.根據權利要求1～3中任意一項所述的方法，其特征在于，所述紫外光譜儀的檢測器波長設定為215nm或280nm。

8.根據權利要求1～3中任意一項所述的方法，其特征在于，所述流動相為乙腈35-55wt％和水45-65wt％的混合溶液中加入0.1-0.2wt％的三氟乙酸而得到。