[發明專利]一種暗紫貝母組織培養方法

無效

• 申請號: 201510216173.1
• 申請日: 2015-05-02
• 公開（公告）號: CN104782488A
• 公開（公告）日: 2015-07-22
• 發明（設計）人: 馮文杰
• 申請（專利權）人: 馮文杰
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 盧翔飛

技術領域

????本發明涉及農業生物技術中植物組織培養的方法，具體地說，涉及一種暗紫貝母組織培養方法。

背景技術

暗紫貝母是我國特有的名貴中藥材，為百合科貝母屬草本植物，以地下鱗莖入藥。有清熱潤肺、化痰止咳功效，用于治療感冒咳嗽、肺熱燥咳、干咳少痰等癥狀。暗紫貝母主要生長在海拔2800～4500米的高山高原草地上，生長周期緩慢，對環境條件要求十分苛刻，其價格昂貴，其野生資源已瀕臨枯竭。因此，暗紫貝母長期存在供不應求的問題。

目前，暗紫貝母主要采用鱗莖和種子繁殖，鱗莖繁殖法用種量大且繁殖系數低，一般1個鱗莖只能收?1.5～1.6個鱗莖。種子繁殖成苗率低，速度慢，需要5～6年才能發育成商品鱗莖的大小。而通過組織培養技術可提高暗紫貝母的繁殖速度，擴大繁殖系數，大大縮短了鱗莖的形成年限，只要6個月左右的時間就可以得到供做藥用的鱗莖。因此，本發明以暗紫貝母鱗片為外植體，通過外植體消毒、不定芽誘導、增殖培養、生根培養、煉苗移栽等過程獲得了暗紫貝母離體再植株，建立了有效的暗紫貝母組培快繁殖技術體系，短時期內即可生產大量種苗，提高繁殖效率，降低生產成本，有利加快其繁育及推廣。

發明內容

????本發明的目的在于提供出一種暗紫貝母組織培養方法，本發明以暗紫貝母鱗片為外植體，通過外植體消毒、不定芽誘導、增殖培養、生根培養、煉苗移栽等過程獲得了暗紫貝母離體再植株，建立了有效的暗紫貝母組培快繁殖技術體系，從而實現了本發明的目的。

本發明的一種暗紫貝母組織培養方法，包括以下的步驟：

（1）外植體消毒：以暗紫貝母鱗莖為外植體，先75%乙醇浸泡15～30s，

無菌水沖洗3～5次，再用10%～20%次氯酸鈉溶液浸泡20～30min，無菌水沖洗3～5次后備用。

????（2）誘導培養：將步驟（1）處理好的暗紫貝母鱗莖切成0.5cm左右的切塊并接種于誘導培養基中進行不定芽誘導。接種后置于每天光照12～14小時，光照強度為1000～2000lx，置于培養溫度為25～28℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養30天后統計誘導率。

（3）增殖培養：以步驟（2）誘導得到不定芽作為材料，將老化的和生長不良的不定芽去掉，并將生長狀態良好的不定芽切成單芽并轉入增殖培養基進行擴繁。接種后置于每天光照12～14小時，光照強度為2000～3000lx，置于培養溫度為25～28℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養30天后統計增殖情況。

（4）生根培養：將經步驟（3）后得到的生長較一致且健壯的未生根的無菌苗單株切下轉入生根培養基誘導。接種后置于每天光照12～14小時，光照強度為2000～3000lx，置于培養溫度為25～28℃，空氣相對濕度為75%的條件下培養30天后統計生根情況。

????（5）煉苗移栽：將生根的無菌苗從培養室中取出放在室外煉苗?30?天后，再將生根苗從瓶中取出洗去基部的培養基，然后移栽到經過高溫滅菌的基質（泥炭土:珍珠巖:蛭石＝3:1:1）中，定期澆澆1/2MS大量元素營養液，覆蓋薄膜，10天后揭膜，揭膜后?20?天統計成活率。

????上述步驟（2）所述的誘導培養基為：MS+1.0～5.0mg/L?NAA+0.1～1.0mg/L?6-BA+0.5～1mg/L?AC+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

????上述步驟（3）所述的增殖培養基為：MS+0.1～1.0mg/L?6－BA+0.1～1.0mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

????上述步驟（4）所述的生根培養基為：1/2MS+0.1～0.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

本發明的優點是以暗紫貝母鱗片為外植體，通過外植體消毒、不定芽誘導、增殖培養、生根培養、煉苗移栽等過程獲得了暗紫貝母離體再植株，建立了有效的暗紫貝母組培快繁殖技術體系。

具體實施方式

????以下實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。

實施例1

?（1）外植體消毒：以暗紫貝母鱗莖為外植體，先75%乙醇浸泡15s，

無菌水沖洗3次，再用10%次氯酸鈉溶液浸泡20min，無菌水沖洗3次后備用。