[發(fā)明專利]一種高效檢測納米顆粒心肌毒性的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510214824.3
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104865348A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉耀文;葉勁松;吳賀君;陳淑娟;何利;李美良;王淑瑤
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 北京國林貿(mào)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11001
• 代理人: 胡琳梅

1.一種高效檢測納米顆粒心肌毒性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

1）制備圖案化纖維電紡接收板：先在絕緣玻璃片上涂覆正性感光膠，再覆蓋一層光掩模，利用光刻機(jī)進(jìn)行刻蝕；再通過直流磁控技術(shù)在刻蝕后的玻璃片上沉積一層金屬銀，所沉積的金屬銀的形狀包括正方形、長方形中的一種，邊長的范圍為20?μm-100?μm；最后清洗掉剩余的正性感光膠；

2）制備圖案化電紡纖維：將醫(yī)用高分子聚合物用有機(jī)溶劑溶解，利用步驟1）所得物作為電紡接收板，通過靜電紡絲技術(shù)制備得到正方形或長方形組成的圖案化電紡纖維；控制所得纖維的直徑為100-300?nm；

????所述醫(yī)用高分子聚合物包括聚乳酸、聚己內(nèi)酯、聚氨酯、聚丙烯腈中的一種，所述有機(jī)溶劑包括丙酮、二甲基甲酰胺中的至少一種；

3）將負(fù)性環(huán)氧樹脂型近紫外線光刻膠SU-8放置在硅片上，利用光刻蝕技術(shù)，去掉其余的SU-8，保留寬為40-150μm、高為70-100μm的SU-8長方體作為模具；將熔融的PDMS置于所得模具上，待PDMS冷卻后，去除模具，得到PDMS腔體；

4）將步驟2）和步驟3）所得物在O₂?或N₂的氛圍下，用等離子體處理60秒，使得步驟2）和步驟3）所得物緊密連接；

5）將5×10⁶-1.0×10⁷個小鼠原代心肌細(xì)胞接種于步驟4）所得物中的圖案化電紡纖維上，利用注射泵將培養(yǎng)基泵入步驟4）所得物的腔體，流速為0.2-0.3?ml/h；再將納米顆粒懸浮于PBS后泵入,于納米顆粒泵入后，記錄小鼠原代心肌細(xì)胞跳動頻率變化、超氧化物歧化酶的酶活、谷胱甘肽過氧化物酶的活性、丙二醛含量、細(xì)胞DNA的損傷、細(xì)胞凋亡率的變化，得出納米顆粒的毒性；

所述納米顆粒包括納米四氧化三鐵、納米二氧化鈦、納米氧化鋅、納米二氧化硅、納米銀顆粒中的一種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1）中沉積的金屬銀的形狀為正方形，邊長的范圍為20?μm-100?μm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2）中，進(jìn)行電紡時，電壓為15-25?KV，流速為0.5-1.0?ml/h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2）中，纖維的直徑為200?nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2）中的醫(yī)用高分子聚合物為聚乳酸，所述有機(jī)溶劑為丙酮與二甲基甲酰胺的混合溶液，丙酮與二甲基甲酰胺的體積比為9:1。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3）中的模具的寬為100?μm，高為80?μm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3）中的模具的寬為50?μm，高為70?μm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟5）中，用于接種的原代小鼠心肌細(xì)胞的數(shù)目為8×10⁶個。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟5）中，培養(yǎng)基的流速為0.3?ml/h。