[發明專利]水解酶法測定不對稱二甲基精氨酸及試劑盒

在審

• 申請號: 201510213009.5
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN105424620A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 許秀麗
• 申請（專利權）人: 北京丹大生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種測定不對稱二甲基精氨酸濃度的方法，樣品順序經過反應體系一、二、三，發生一系列生化反應，最終通過測定吸光值，反應氨的含量，推知樣品中ADMA的含量。

1)反應體系一為二甲基精氨酸二甲氨基水解酶最適反應體系，作用于ADMA生成二甲胺和L-瓜氨酸。

2)反應體系二為包含鳥氨酸甲氨酰轉移酶(omithinetranscarbamoylase，)和氨甲酰激酶(carbamatekinase)的最適反應體系，作用于瓜氨酸生成L-鳥氨酸、氨和二氧化碳。

3)反應體系三為包含水楊酸、亞硝基鐵氰化鈉和次氯酸鈉的最適反應體系，作用于氨生成藍綠色的靛酚藍，通過著色深淺，比色定量氨。

4)可選的，反應體系三也可為包含底物γ-酮戊二酸、NADPH和谷氨酸脫氫酶的最適反應體系。通過自動分析儀監測NADPH的下降速率，從而確定氨氨含量。

2.根據權利要求1所述的測定不對稱二甲基精氨酸濃度的方法，其特征在于樣品來源于任何包含水的液態物質，優選地，樣品為尿液或血液。

3.根據權利要求1或2所述的測定不對稱二甲基精氨酸濃度的方法，其特征在于通過鳥氨酸甲氨酰轉移酶(omithinetranscarbamoylase，)和氨甲酰激酶(carbamatekinase)作用于瓜氨酸生成L-鳥氨酸、氨和二氧化碳。

4.根據權利要求1或2所述的測定不對稱二甲基精氨酸濃度的方法，其特征在于測定氨濃度時采用二乙酰一肟-氨基硫脲比色法或谷氨酸脫氫酶速率法測定氨的含量。

優選地，實驗室研究選用二乙酰一肟-氨基硫脲比色法測定氨的含量，該方法穩定，對試驗設備要求不高。

優選地，臨床應用選用谷氨酸脫氫酶速率法測定氨的含量，該方法便于自動化，需要專門的自動化生化分析儀配合。

5.根據權利要求1至3所述的測定不對稱二甲基精氨酸濃度的方法，其特征在于直觀測定的氨含量即為樣品中ADMA含量。優選地，反應體系一至三中，反應底物與反應產物為等摩爾數，測定的氨含量與ADMA是等摩爾的關系。

6.一種不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于，包含試劑R1，試劑R2，試劑R3，緩沖液，穩定劑，ADMA標準品的液體試劑盒或包含試劑R1，試劑R2，試劑R3，ADMA標準品的干粉試劑盒。

7.根據權利要求5所述的不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于，所述的試劑R1，R2，R3緩沖液是TRIS緩沖液、甘氨酸緩沖液或磷酸緩沖液，緩沖液的PH值為4.5-8.5。

8.根據權利要求5所述的不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于，所述的穩定劑是BSA，甘油，甘露醇，疊氮鈉，EDTA。

9.根據權利要求5所述的不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于，所述的ADMA標準品為添加了ADMA純品的人血清或其它類似血清基質的液體。

10.根據權利要求5所述的不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于，所述的試劑R1為包含二甲基精氨酸二甲氨基水解酶最適反應體系的混合物。

11.根據權利要求5所述的不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于，所述的試劑R2為包含鳥氨酸甲氨酰轉移酶(omithinetranscarbamoylase，EC2.1.3.3)和氨甲酰激酶(carbamatekinase，EC2.7.2.2)的最適反應體系的混合物。

12.根據權利要求5所述的不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于，所述的試劑R3為包含水楊酸、亞硝基鐵氰化鈉和次氯酸鈉的最適反應體系或底物γ-酮戊二酸、NADPH和谷氨酸脫氫酶的最適反應體系的混合物。

13.根據權利要求5所述的不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于，通過分光光度計或自動生化分析儀最終確定氨含量。

14.根據權利要求5所述的不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于數據分析時，氨的含量即為ADMA含量umol/L。

15.根據權利要求8所述的不對稱二甲基精氨酸診斷試劑盒，其特征在于，所述的ADMA標準品為添加了ADMA純品或NH₄⁺純品的人血清或其它類似血清基質的液體。優選地，選擇添加了ADMA純品的人血清或其它類似血清基質的液體。