[發(fā)明專利]用于肉制品中鴨源性成分快速鑒別的鎖核酸探針熒光定量PCR方法及其引物和鎖核酸探針序列

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510212812.7
• 申請日: 2015-04-29
• 公開（公告）號(hào): CN105671035A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許如蘇;魏霜;周廣彪;劉中勇;段建發(fā);陳冠武;蘇建暉
• 申請（專利權(quán)）人: 中華人民共和國汕頭出入境檢驗(yàn)檢疫局
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.用于肉制品中鴨源性成分快速鑒別的鎖核酸探針熒光定量PCR的引物序列和探針序列，其特征是所述的引物和鎖核酸探針的序列為：

上游引物：5’-ACCTTCCCGCACCCTCTAAT-3’；

下游引物：5’GGCAGATGGCGAGCAGAGAT-3’；

Taqman-LNA探針：

5’-CY5-ATCTCYG+CYTGATGAAACTTCGG-BHQ3-3’。

2.用于肉制品中鴨源性成份快速鑒別的鎖核酸探針熒光定量PCR的方法：其特征在于包括如下步驟：

（１）設(shè)計(jì)引物和鎖核酸探針的序列：

上游引物：5’-ACCTTCCCGCACCCTCTAAT-3’；

下游引物：5’GGCAGATGGCGAGCAGAGAT-3’；

鎖核酸探針：

5’-CY5-ATCTCYG+CYTGATGAAACTTCGG-BHQ3-3’；

（２）采用步驟(1)設(shè)計(jì)的引物和探針建立鴨源性成分的鎖核酸探針熒光定量PCR檢測方法；其特征在于：熒光定量PCR檢測的反應(yīng)體系為：20μL，包括10μLProbesMaster2×conc，其中包含有dNTP，Mg²⁺以及Taq酶等，所述步驟(1)設(shè)計(jì)的10μmol/L上下游引物F/R各0.8μL，10μmol/LTaqman-LNA探針P0.3μL，DNA模板1μL，超純水補(bǔ)至20μL；反應(yīng)參數(shù)：95℃8min；95℃，8s，58℃，25s，采集熒光信號(hào)，35～40循環(huán)；其中預(yù)變性時(shí)間取決于Taq酶；應(yīng)用儀器自帶分析軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析處理，試驗(yàn)設(shè)純鴨肉DNA陽性對照和去離子水空白對照，陽性對照Ct值≤20，且有典型擴(kuò)增曲線，空白對照無Ct值或Ct值＞30，且無典型擴(kuò)增曲線，則試驗(yàn)有效，可進(jìn)行結(jié)果判定;樣品無Ct值，或Ct_（樣品）＞30，或｜Ct_（樣品）-Ct_（陽性）｜＞7，且樣品無明顯擴(kuò)增曲線的，判為陰性，報(bào)告樣品不含鴨源性成分；｜Ct_（樣品）-Ct_（陽性）｜≤7，且樣品擴(kuò)增曲線明顯呈對數(shù)增長，判為陽性，報(bào)告樣品中摻有鴨源性成分；｜Ct_（樣品）-Ct_（陽性）｜＞7，Ct_（樣品）＜30，且樣品擴(kuò)增曲線明顯呈對數(shù)增長，判為假陽性，報(bào)告樣品污染鴨源性成分。