[發明專利]一種葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201510211769.2
• 申請日: 2015-04-29
• 公開（公告）號: CN104784153B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 劉芬菊;華松;俞家華;華道本;周媛;張昊文
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/36;A61K47/20;A61P35/00
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒

1.一種用于制備腫瘤靶向藥物的葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒的制備方法，該制備方法包括如下步驟：

1）混合溶液的制備：按照葉酸:脫水縮合劑:縮合促進劑=1:1~1.2:1~1.2的摩爾比，將上述反應物加入到無水溶劑中，在室溫條件下攪拌至溶解，得到混合溶液；所述脫水縮合劑選自N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N,N'-二異丙基碳二亞胺、N,N'-二環己基碳二亞胺中的任意一種；所述縮合促進劑選自N-羥基琥珀酰亞胺、1-羥基苯并三氮唑、1-羥基-7-偶氮苯并三氮唑中的任意一種；所述溶劑選自二甲基亞砜、乙醇、甲醇中的任意一種；

2）葉酸的接枝：按照葉酸中的羧基:殼聚糖中的氨基=1:1的摩爾比，將步驟1）中得到的混合溶液緩慢加入到磺酸甜菜堿-殼聚糖水溶液中，在室溫、避光條件下攪拌16~24h，得到葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒水溶液；

其中，所述磺酸甜菜堿-殼聚糖通過下法制得：首先，按照1:1:5~6的重量比，將殼聚糖、磺酸甜菜堿和RAFT試劑溶解在含有1%鹽酸和丙酮的混合溶液中，惰性氣體除氧后密封，暴露在輻射劑量為10Gy/min的⁶⁰Co源下反應15~20h；其次，將反應物置于截留分子量為25000Da的透析袋中，用去離子水透析48~72h，得到留在透析袋中的磺酸甜菜堿-殼聚糖水溶液；最后，將得到的水溶液于-20℃預凍6~8h，然后冷凍干燥36~48h，得到兩親性納米顆粒磺酸甜菜堿-殼聚糖；

其中：所述殼聚糖的脫乙酰度為95.2%，平均分子量為50000g/mol；所述磺酸甜菜堿為3-[N,N-二甲基-[2-(2-甲基丙-2-烯酰氧基)乙基]銨]丙烷-1-磺酸內鹽；所述RAFT試劑為S,S’-二(R,R’-二甲基-R’’-乙酸)三硫代碳酸酯；所述含有1%鹽酸和丙酮的混合溶液中1%鹽酸和丙酮的體積比為7:3；所述惰性氣體選自氮氣、氦氣、氬氣中的任意一種；

3）透析和凍干：將步驟2）中得到的葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒水溶液置于透析袋中，首先用堿液透析12~18h，再用去離子水透析24~48h，將得到的透析液在12000~14000rpm下離心40~60min，最后將上清液冷凍干燥，得到葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1）中所述葉酸、脫水縮合劑、縮合促進劑之間的摩爾比為1:1:1。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3）中所述透析袋的截留分子量為3500Da；所述堿液選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣中的任意一種的水溶液，其摩爾濃度為0.01mM。

4.根據上述權利要求中任一項所述的制備方法制備的葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒。

5.根據權利要求4所述的葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒在制備腫瘤靶向藥物中的應用，所述應用為一種包裹抗腫瘤藥物的腫瘤靶向納米顆粒的制備方法，其包括如下步驟：

A）納米顆粒預混液的制備：按照1mg葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒:0.5~2ml水的比例，將葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒溶解于水中，攪拌均勻后，得到納米顆粒預混液；

B）抗腫瘤藥物預混液的制備：按照1mg抗腫瘤藥物:0.2~1ml有機溶劑的比例，將抗腫瘤藥物溶解于有機溶劑中，超聲處理后，得到抗腫瘤藥物預混液；所述抗腫瘤藥物為依托泊苷；

C）混合包裹及凍干：將兩種預混液混合并振蕩，向混合液中通入惰性氣體后，將混合液離心，并將離心后的殘留固體冷凍干燥，得到包裹抗腫瘤藥物的腫瘤靶向納米顆粒。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，在步驟A）中，按照1mg葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒:0.5ml水的比例，將葉酸修飾的磺酸甜菜堿-殼聚糖納米顆粒溶解于水中；所述水選自蒸餾水、去離子水中的任意一種。