[發明專利]一種熒光增強型苯硫酚熒光探針的制備及應用

有效

• 申請號: 201510202960.0
• 申請日: 2015-04-27
• 公開（公告）號: CN104804728A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 宋相志
• 申請（專利權）人: 蘇州羅蘭生物科技有限公司
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C07D241/42;G01N21/64
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技術領域

本發明涉及的是化學分析檢測技術領域，具體涉及一種新型的苯硫酚熒光探針的制備方法以及該熒光探針在檢測苯硫酚方面的應用。

背景技術

苯硫酚為無色液體，具有特殊臭味，主要作為醫藥、農藥等有機合成的中間體。人體吸入后會引起支氣管痙攣、水腫及化學性肺炎，嚴重時會導致死亡。所以開發便捷快速檢測苯硫酚的方法對環境及人類健康具有至關重要的意義。熒光探針檢測法具有操作簡便、易于實現實時原位檢測、高靈敏度和高選擇性的優點，受到了研究者的廣泛關注。目前開發苯硫酚熒光探針的一大挑戰在于探針能否選擇性區分苯硫酚與脂肪硫醇，并且長波發射的熒光探針用于細胞內熒光檢測時，不僅可以減少對生物樣品的破壞，還能夠減小背景熒光干擾，所以，開發長波長、高選擇性的苯硫酚熒光探針對實現生物體內目標檢測具有重要價值。

發明內容

本發明目的之一是提供一種合成簡單、反應條件溫和、成本較低的熒光探針合成方法；目的之二是提供一種靈敏度高、選擇性好，抗干擾能力強，能夠實現熒光法檢測苯硫酚的熒光探針。

本發明使用熒光法檢測苯硫酚，以喹喔啉衍生物為熒光團，以2，4-二硝基苯醚為苯硫酚的識別基團。

本發明解決問題采取的技術方案為，一種熒光檢測苯硫酚熒光探針，其分子結構式為，該熒光探針的合成路線如下，

具體制備方法包括以下步驟：1)將4-甲氧基-2硝基苯胺和10％Pd/C溶于甲醇中，用氬氣充分換氣三次后通入氫氣，升溫至60℃反應12h，反應結束后，冷卻至室溫，抽濾，除去催化劑，用旋轉除去溶劑，得到棕色液體即為化合物6。2)將化合物6溶于乙腈中，加入乙二醛溶液，升溫至60℃反應6h。反應結束后冷卻，旋轉除去溶劑得到棕色固體即為化合物5。3)將化合物5溶于甲苯中，將反應液冷卻至0℃。向冷卻的溶液中緩慢加入硼氫化鈉，得到的棕黃色溶液繼續攪拌10min。將醋酸緩慢滴加到體系中，并保持反應液溫度在5-10℃之間，滴加完畢后繼續反應1h。升溫至回流，反應5h。反應結束后，冷卻至室溫，向反應液中加入去離子水。有機層(甲苯)與水層分開，有機層用無水硫酸鈉干燥，水層用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥，旋轉除去溶劑，得到棕黃色油狀液體即為化合物4，無需純化，直接用于下一步反應。4)氬氣保護下，將DMF冷卻至5℃，在滴加三氯氧磷，繼續反應15min后，加入化合物4。將反應液升溫至70-80℃，繼續反應4h。反應結束后，將反應液倒入冰水中，用冷的15％的氫氧化鈉溶液進行中和，然后，反應液用乙酸乙酯萃取，有機層用無水硫酸鈉干燥。除去溶劑，柱層析純化得到黃色液體即為化合物3。5)氬氣保護下，將鋁粉加入乙腈中，室溫攪拌。向其中緩慢加入碘，加入完畢后，將化合物3溶于乙腈中，滴加入體系，滴加完畢后，升溫至回流繼續反應12h。反應終止，降溫，將反應液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥，旋轉除去溶劑，柱層析純化得到黃色液體即為化合物2。6)將化合物2、2，4-二硝基氟苯溶于DMF中，再加入一滴哌啶，然后加入K₂CO_3，加熱至70℃反應3h，停止反應冷卻至室溫，將其倒入50mL水中，用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥，旋干得粗產品，最終經柱層析分離得到化合物1。7)將化合物1、丙二腈溶于乙醇和二氯甲烷混合溶劑中,加入少量哌啶，室溫攪拌3h，停止反應，將反應液倒入水中，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥，旋蒸除去溶劑，柱層析分離得到探針分子。在本說明書的實施例中更詳細地說明了該探針的合成和檢測方法。

本發明的熒光分子探針使用方法如下，將探針分子溶解在含有30％乙腈、1mmol?CTAB、pH為7.4的HEPES緩沖溶液中，室溫下進行測試。當加入苯硫酚時，由于2,4-二硝基苯醚基團可以在苯硫酚的誘導下發生的裂解，使熒光得以恢復。探針分子與苯硫酚作用原理如下，

本發明的苯硫酚熒光探針的具體特征如下：探針分子無明顯發射峰，但與苯硫酚作用后，探針分子在626nm處出現明顯的發射峰，熒光強度增強了50倍以上。

本發明所述的探針分子合成簡單，成本較低，對苯硫酚的選擇性好、抗干擾能力強、響應速度快使得該熒光探針在生物化學，環境科學等領域具有實際的應用價值。

附圖說明