[發明專利]一種致病輪枝鐮孢菌室內接種鮮食玉米的方法

有效

• 申請號: 201510178384.0
• 申請日: 2015-04-15
• 公開（公告）號: CN104770175B
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發明（設計）人: 李余良;韓福光;劉建華;李春艷;夏磊
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院作物研究所
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00;A01G7/00;A01G7/06;C12N1/14;C12R1/77
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司44245
• 代理人: 裘暉

技術領域

本發明涉及植物病害接種鑒定技術，具體涉及一種莖腐病菌致病輪枝鐮孢菌早期室內接種鮮食玉米的方法。

背景技術

玉米是世界上最重要的糧食作物之一，然而它能被許多土傳病原菌所侵染，導致產量損失和品質下降。玉米莖腐病常見的有兩種，細菌性莖腐病和真菌性莖腐病。細菌性莖腐病是由細菌侵染發育中期的玉米植株引起莖稈腐爛。真菌性莖腐病是由鐮孢菌或腐霉菌引起的為害玉米根和莖基部的一類重要土傳真菌病害。病菌在整個生育期都可侵染根系造成根腐，初生根和不定根腐爛變短，髓部中空，須根少而黑，整個根系容易拔除。在莖基節間開始出現莖部癥狀，形成縱向擴展的不規則狀褐色病斑，莖基1～3節變褐發軟，植株極易倒伏。葉片癥狀主要有青枯型、黃枯型等。玉米乳熟末期至蠟熟期為發病高峰期。由輪枝鐮孢菌(Fusarium verticillioides)等引起的玉米莖腐病是世界上分布最為廣泛的土傳病害。自20世紀80年代以來，我國主要玉米產區這種病害的發生一直相當普遍，一些地區發生相當嚴重，對玉米安全生產造成了很大的影響。不僅如此，由于輪枝鐮孢菌可產多種大量毒素，如伏馬毒素(FB_l、FB₂和FB₃)、鐮孢酸(Fusarie acid)等污染農產品，引起人類的食用安全和畜禽疾病，如食管癌、肝癌、胃癌、豬肺水腫及白腦質病等。

隨著華南鮮食甜糯玉米種植面積不斷增長，一些抗性差的品種在生產中應用，莖腐病已經成為華南鮮食玉米主產區主要病害，據相關統計，莖腐病每年造成玉米產量損失10％～30％，制約甜糯玉米在生產中的應用。輪枝鐮孢菌是造成玉米莖腐病的病原菌之一，對甜糯玉米種質資源、品種抗莖腐病接種鑒定是遺傳育種的重要研究領域，也是準確掌握與利用育種材料及品種對莖腐病抗性的要求。因此，探索簡便、有效的鮮食甜糯玉米莖腐病接種鑒定方法顯得十分重要。

近年來，我們對廣州地區感病鮮食玉米調查與鑒定后發現，莖腐病主要是由輪枝鐮孢菌造成的。目前，鐮孢菌接種方法有埋根法、莖稈針刺法等，埋根接種法是用玉米粒培養基擴繁病原菌后，將玉米根系一側土壤扒開，將擴繁的帶菌玉米粒埋于玉米露出的根系處，一定時間后調查根部發病情況。類似的還有土埋傷根法，即在玉米抽絲后一周前后，將一定量的菌劑接種在斷根處。還有采用玉米播種時土壤埋菌接種和成株期傷莖根埋法接種相結合的方法，總的來說，此法接種病菌量大，費工，費時，鑒定大量玉米材料受到限制。在田間條件下，將帶菌玉米粒埋在植株根系土壤2～3厘米處，受環境影響大，效果及可控性不強。莖稈針刺法是在玉米生長期用針管刺穿莖稈基部將病原菌注射到組織，也存在費工、費時、注射菌量少、效果不明顯等缺點。

因此，需要尋找一種可以在室內方便接種鑒定由輪枝鐮孢菌引起的玉米莖腐病的方法。

發明內容

為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的目的在于提供一種致病輪枝鐮孢菌室內接種鮮食玉米的方法。該方法不依賴大田自然條件，接種菌量少、周期短、效率高、可結合田間接種試驗，輔助驗證品種對玉米莖腐病的抗性。該方法提供有效的致病輪枝鐮孢菌接種玉米技術，并可解決玉米對莖腐病抗性的早期鑒定問題。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種致病輪枝鐮孢菌室內接種鮮食玉米的方法，包括如下步驟：

(1)分離獲得致病輪枝鐮孢菌(Fusarium verticillioides)的菌株；

(2)致病輪枝鐮孢菌的擴繁：將預先準備好的玉米粒用水泡漲，然后高壓滅菌，冷卻后做為擴繁培養基，即玉米粒擴繁培養基；挑取若干菌絲置于玉米粒擴繁培養基上進行擴繁；

(3)待接種玉米品種準備：挑選無損、無霉爛、無蟲口、無病斑的健康玉米品種種子，消毒后備用；

(4)致病輪枝鐮孢菌與玉米種子共培養接種：取步驟(2)中擴繁的致病輪枝鐮孢菌玉米粒與步驟(3)的待接種玉米混合后，放在墊有滅菌濾紙的器皿中，恒溫光照培養；同時設置未接種玉米品種作為對照；

(5)將步驟(4)經培養萌發后帶有幼芽的玉米種子進行播種；

(6)玉米植株抗病性鑒定：步驟(5)播種后定期澆適量水保濕，置于室溫經過15～20天后考察玉米植株的抗病性；

玉米苗期莖腐病調查分級標準：

0級，整株生長正常，無病；

1級，地上地下部生長基本正常，根部可見少量病斑，病斑面積占根表總面積1/4以下，根群顏色白中有褐；