[發(fā)明專利]一種致病輪枝鐮孢菌室內(nèi)接種鮮食玉米的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510178384.0
• 申請日: 2015-04-15
• 公開（公告）號: CN104770175B
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李余良;韓福光;劉建華;李春艷;夏磊
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00;A01G7/00;A01G7/06;C12N1/14;C12R1/77
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司44245
• 代理人: 裘暉

1.一種致病輪枝鐮孢菌室內(nèi)接種鮮食玉米的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)分離獲得致病輪枝鐮孢菌(Fusarium verticillioides)的菌株；

(2)致病輪枝鐮孢菌的擴(kuò)繁：將預(yù)先準(zhǔn)備好的玉米粒用水泡漲，然后高壓滅菌，冷卻后做為擴(kuò)繁培養(yǎng)基，即玉米粒擴(kuò)繁培養(yǎng)基；挑取若干菌絲置于玉米粒擴(kuò)繁培養(yǎng)基上進(jìn)行擴(kuò)繁；

(3)待接種玉米品種準(zhǔn)備：挑選無損、無霉?fàn)€、無蟲口、無病斑的健康玉米品種種子，消毒后備用；

(4)致病輪枝鐮孢菌與玉米種子共培養(yǎng)接種：取步驟(2)中擴(kuò)繁的致病輪枝鐮孢菌玉米粒與步驟(3)的待接種玉米混合后，放在墊有滅菌濾紙的器皿中，恒溫光照培養(yǎng)；同時(shí)設(shè)置未接種玉米品種作為對照；

所述的致病輪枝鐮孢菌(Fusarium verticillioides)的菌株分離自發(fā)生莖腐病的玉米植株上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：還包括如下步驟：

(5)將步驟(4)經(jīng)培養(yǎng)萌發(fā)后帶有幼芽的玉米種子進(jìn)行播種；

(6)玉米植株抗病性鑒定：步驟(5)播種后定期澆適量水保濕，置于室溫經(jīng)過15～20天后考察玉米植株的抗病性。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的分離獲得致病輪枝鐮孢菌，包括如下具體步驟：

①感病材料處理：從大田自然條件下發(fā)生莖腐病的玉米植株上采取病害莖稈，剖開，取被害部位莖髓組織，切成0.3～0.5cm小塊，無菌條件下用0.1％升汞溶液浸泡1～2min，無菌水漂洗1～2次，取出組織塊用75％酒精消毒5～10min，無菌水漂洗3～4次，取出材料，接種于固體PDA培養(yǎng)基上，26～28℃恒溫暗培養(yǎng)分離致病輪枝鐮孢菌；

②致病輪枝鐮孢菌株的分離：步驟①處理后的感病材料在培養(yǎng)基上培養(yǎng)2～3d，在生長有菌絲的培養(yǎng)皿里挑取單個(gè)菌絲轉(zhuǎn)接于新的固體PDA培養(yǎng)基上置于恒溫中26～28℃進(jìn)行培養(yǎng)，直到白色菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基；

③致病輪枝鐮孢菌的純化鑒定：挑取步驟②中單個(gè)菌絲置于10×光學(xué)顯微鏡下觀察病原菌孢子形態(tài)，確認(rèn)為近年廣州地區(qū)發(fā)生玉米莖腐病的致病輪枝鐮孢菌。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述的鮮食玉米包括甜玉米的自交系、種質(zhì)材料或雜交種；或者，所述的鮮食玉米包括糯玉米的自交系、種質(zhì)材料或雜交種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟(2)中所述的擴(kuò)繁的條件為26～28℃恒溫暗培養(yǎng)3～5d。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟(3)中所述的待接種玉米品種為鮮食玉米；

所述的鮮食玉米包括甜玉米的自交系、種質(zhì)材料或雜交種；或者，所述的鮮食玉米包括糯玉米的自交系、種質(zhì)材料或雜交種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟(3)中所述的消毒的條件為用75％酒精消毒5～10min后，再用5％次氯酸鈉溶液處理15～20min，用無菌水沖洗2～3次。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟(4)中所述的混合為步驟(2)中擴(kuò)繁的致病輪枝鐮孢菌玉米粒與步驟(3)的待接種玉米按致病輪枝鐮孢菌玉米粒與待接種玉米的種子量1:(1～1.5)進(jìn)行混合。

9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟(4)中所述的恒溫光照培養(yǎng)的條件為26～28℃恒溫光照培養(yǎng)5～7天。