[發明專利]皮膚纖維母細胞制劑及其制備方法、應用

在審

• 申請號: 201510168666.2
• 申請日: 2015-04-10
• 公開（公告）號: CN104711216A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發明（設計）人: 陳海佳;王一飛;葛嘯虎;曾維杰;羅二梅
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K35/33;A61K35/36;A61K8/98;A61P17/02;A61Q19/00;A23L1/29
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及皮膚纖維母細胞制劑及其制備方法、應用。

背景技術

皮膚創傷修復是一個復雜的生物學過程。纖維母細胞是這一生物過程中的主要修復細胞之一。皮膚纖維母細胞能夠大量合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白、糖蛋白等多種細胞外成分，在傷口愈合和免疫調節等方面具有廣泛和明顯的作用，具有廣闊的應用前景。纖維母細胞還能夠維持各種生長因子、細胞素、基質金屬蛋白酶及金屬蛋白酶組織抑制因子的合成與分解平衡；被認為是創傷修復的工程師、建筑者和管理員。了解與控制纖維母細胞的生物學行為是促進軟組織損傷修復、創傷愈合、預防瘢痕形成的基礎與關鍵。

目前流通于市面的燒燙傷皮膚再生修復膏。該燙傷膏在中草藥高效有機成分提純基礎上，添加了成纖維細胞生長因子(FGF)，從而在具有抗感染，收斂結痂，減少創面滲液的基礎上增加了促進上皮細胞生長，促進壞死組織脫落，減輕瘢痕組織增生的作用。

以上所提及的燒燙傷皮膚再生修復膏雖然比傳統藥物更好的解決了對燒燙傷治療時間長、易感染、愈后留有疤痕等問題。但是成纖維細胞生長因子(FGF)在常溫下容易被降解，難以保持原有的生物活性。

發明內容

有鑒于此，本發明提供皮膚纖維母細胞制劑及其制備方法、應用。纖維母細胞制成活細胞制劑作用于供體真皮層，很好地克服了上述技術問題，纖維母細胞能夠馬上分泌出成纖維細胞生長因子(FGF)，并且保持很高的活性，在促進皮膚修復的層面上效果更為明顯，而且無任何毒副作用，安全可靠。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種皮膚纖維母細胞制劑的制備方法，包括如下步驟：

本發明提供了一種皮膚纖維母細胞制劑的制備方法，包括如下步驟：

步驟1：獲得皮膚纖維母細胞，培養；

步驟2：待細胞爬出70％以上時，對貼壁細胞消化、終止消化、重懸、計數、接種培養，獲得纖維母細胞；

步驟3：消化纖維母細胞，終止消化，離心，棄上清，洗滌，收集沉淀重懸，獲得皮膚纖維母細胞制劑。

在本發明的一些具體實施方案中，皮膚纖維母細胞制劑的制備方法中步驟1所述培養采用完全培養基和雙抗培養；所述完全培養基包括高糖DMEM培養基+10％FBS；所述雙抗為青霉素100U/mL和鏈霉素100μg/mL；

所述皮膚纖維母細胞接種培養密度為5～10×10⁵cell/mL。

所述雙抗的濃度為1％。

在本發明的一些具體實施方案中，皮膚纖維母細胞制劑的制備方法中步驟2所述消化為采用0.25％胰蛋白酶消化2～3min。

在本發明的一些具體實施方案中，皮膚纖維母細胞制劑的制備方法中步驟2所述終止消化采用完全培養基，所述完全培養基包括高糖DMEM培養基+10％FBS。

在本發明的一些具體實施方案中，皮膚纖維母細胞制劑的制備方法中步驟3所述消化采用胰蛋白酶溶液，所述胰蛋白酶的酶活為50萬U/g；所述胰蛋白酶溶液的濃度為0.25％，所述加入胰蛋白酶溶液的體積為淹沒過纖維母細胞。

在本發明的一些具體實施方案中，皮膚纖維母細胞制劑的制備方法中步驟3所述消化的溫度為37℃，所述消化的時間為2～3min。

在本發明的一些具體實施方案中，皮膚纖維母細胞制劑的制備方法中步驟3所述離心為1000rpm/min離心5min。

作為優選，洗滌采用生理鹽水洗滌。

在本發明的一些具體實施方案中，皮膚纖維母細胞制劑的制備方法中步驟3所述重懸采用生理鹽水和白蛋白重懸。

本發明還提供了所述皮膚纖維母細胞制劑的制備方法獲得的皮膚纖維母細胞制劑。

纖維母細胞不僅可以合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白等成分，還可以分泌一些重要的細胞生長因子如纖維母細胞生長因子(FGF)，并保持著較高的活性，刺激皮膚肉芽組織的形成和促進肉芽組織的上皮化，從而縮短創傷的愈合時間以及減少疤痕的形成。而且是自體的細胞，不存在排斥性，安全可靠。

本發明還提供了所述皮膚纖維母細胞制劑在制備皮膚再生修復的藥物、化妝品、食品、保健品中的應用。