[發(fā)明專利]皮膚纖維母細(xì)胞制劑及其制備方法、應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510168666.2
• 申請(qǐng)日: 2015-04-10
• 公開（公告）號(hào): CN104711216A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳海佳;王一飛;葛嘯虎;曾維杰;羅二梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州賽萊拉干細(xì)胞科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;A61K35/33;A61K35/36;A61K8/98;A61P17/02;A61Q19/00;A23L1/29
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

1.一種皮膚纖維母細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：獲得皮膚纖維母細(xì)胞，培養(yǎng)；

步驟2：待細(xì)胞爬出70％以上時(shí)，對(duì)貼壁細(xì)胞消化、終止消化、重懸、計(jì)數(shù)、接種培養(yǎng)，獲得纖維母細(xì)胞；

步驟3：消化纖維母細(xì)胞，終止消化，離心，棄上清，洗滌，收集沉淀重懸，獲得皮膚纖維母細(xì)胞制劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1所述培養(yǎng)采用完全培養(yǎng)基和雙抗培養(yǎng)；所述完全培養(yǎng)基包括高糖DMEM培養(yǎng)基+10％FBS；所述雙抗為青霉素100U/mL和鏈霉素100μg/mL；

所述皮膚纖維母細(xì)胞接種培養(yǎng)密度為5～10×10⁵cell/mL；

所述雙抗的濃度為1％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟2所述消化為采用0.25％胰蛋白酶消化2～3min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，步驟2所述終止消化采用完全培養(yǎng)基，所述完全培養(yǎng)基包括高糖DMEM培養(yǎng)基+10％FBS。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，步驟3所述消化采用胰蛋白酶溶液，所述胰蛋白酶的酶活為50萬U/g；所述胰蛋白酶溶液的濃度為0.25％，所述加入胰蛋白酶溶液的體積為淹沒過纖維母細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，步驟3所述消化的溫度為37℃，所述消化的時(shí)間為2～3min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，步驟3所述離心為1000rpm/min離心5min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，步驟3所述重懸采用生理鹽水和白蛋白重懸。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的皮膚纖維母細(xì)胞制劑的制備方法獲得的皮膚纖維母細(xì)胞制劑。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的皮膚纖維母細(xì)胞制劑在制備皮膚再生修復(fù)的藥物、化妝品、食品、保健品中的應(yīng)用。