[發明專利]一種瑪咖多倍體植株的培育方法

有效

• 申請號: 201510156556.4
• 申請日: 2015-04-03
• 公開（公告）號: CN104686370B
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 王樞
• 申請（專利權）人: 會澤樞康中草藥種植有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司53114
• 代理人: 馬汝蘭

1.一種瑪咖多倍體植株的培育方法，其特征在于，所述培育方法包括以下步驟：

（1）以B₅為基本培養基，附加蔗糖20000mg/L和瓊脂粉4800mg/L，調整pH值為5.4-5.8，制得培養基A；用細紗布將瑪咖種子按100粒/包，包好放到流水下沖洗2 h后，置于超凈工作臺上，用體積比75％的酒精浸泡60 s，再用質量比0.1％ HgCl₂滅菌8 min，最后用無菌水沖洗10次，每次不低于2 min，之后放在無菌濾紙上，打開細紗布吸干表面水分，得到消毒滅菌處理的種子，將所述消毒滅菌后的瑪咖種子接種于所述培養基A中，在光照度1500-2000 lx，光照時間10 h/d，溫度控制在20±1℃的條件下，進行種子萌發；

（2）以B₅為基本培養基，附加萘乙酸NAA 1.5-2.0 mg/L、玉米素ZT 0.1-1.0 mg/L、秋水仙素0.5-2.0 mg/L、蔗糖20000mg/L和瓊脂粉4800mg/L，調整pH值為5.4-5.8，制得愈傷組織誘導培養基B；所述步驟（1），種子在所述培養基A中培養5-7d后，幼苗子葉完全展開，將下胚軸切為0.5-1.0 cm大小，轉接至所述愈傷組織誘導培養基B中，在光照度1500-2000 lx，光照時間10 h/d，溫度控制在20±1℃的條件下，培養5d后有愈傷組織出現，20d后愈傷組織生長迅速，質地緊密，表被白色絨毛；

（3）以B₅為基本培養基，附加6-芐胺基嘌呤6-BA 1.0-2.0 mg/L、萘乙酸NAA 1.5-2.0 mg/L、玉米素ZT 0.1-1.0 mg/L、秋水仙素0.05-0.5 mg/L、蔗糖20000 mg/L和瓊脂粉4800 mg/L，調整pH值為5.4-5.8，制得叢生芽誘導與增殖培養基C；將所述步驟（2）中培養的愈傷組織切割為0.5-1.0 cm²大小，轉接至所述叢生芽誘導與增殖培養基C中，在光照度1500-2000 lx，光照時間10 h/d，溫度控制在20±1℃的條件下，培養20d，待叢生芽生長旺盛時，將叢生芽切割為3-5芽一叢，轉接至另一個新鮮的所述叢生芽誘導與增殖培養基C中，如此反復繼代增殖3-4代，即獲得瑪咖多倍體芽；

（4）以1/2B₅為基本培養基，附加萘乙酸NAA 0.1-0.5 mg/L、吲哚丁酸IBA 0.1-0.5 mg/L、活性炭AC 0.5-1.5 mg/L、蔗糖10000 mg/L和瓊脂粉4800mg/L，調整pH值為5.4-5.8，制得生根培養基D；切取所述步驟（3）所得的多倍體芽中高3-4 cm、生長健壯的單芽接種于所述生根培養基D中，在光照度1500-2000 lx，光照時間10 h/d，溫度控制在20±1℃的條件下，培養25 d后獲得瑪咖多倍體試管生根苗；

（5）取所述步驟（4）所得的高6-8cm的生根苗置于室溫下煉苗3 d后，打開瓶蓋從所述生根培養基D中取出幼苗，將殘留培養基清洗干凈，放入質量濃度0.1-0.2%的多菌靈溶液中消毒2-3 min后，移栽至裝有經消毒的腐殖質的漂浮盤中，保持18-25℃溫度漂浮培養60 d后，即得瑪咖多倍體移栽苗。