[發(fā)明專利]一種促進杏黃兜蘭無菌苗生長及增殖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510147487.0
• 申請日: 2015-03-31
• 公開（公告）號: CN104719166A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 嚴(yán)寧;牟宗敏;胡虹
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明協(xié)立知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53108
• 代理人: 馬曉青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種促進杏黃兜蘭無菌苗生長及增殖的方法。

背景技術(shù)

兜蘭屬(Paphiopedilum)，隸屬于蘭科(Orchidaceae)杓蘭亞科(Subfamily?Cypripedioideae)。大多為地生、半附生或附生的多年生草本植物，其株形娟秀，開花時花葶從基生葉叢中抽出，花大而色澤艷麗，唇瓣特化成兜狀或深囊狀，形狀奇特，花期短則數(shù)周，長達(dá)數(shù)月。是蘭科中具有很高觀賞價值的類群之一，被譽為“拖鞋蘭”或“仙履蘭”，受到蘭花愛好者及園藝學(xué)家的廣泛關(guān)注與喜愛，在植物界和園藝界中享有盛譽。兜蘭屬在全世界約有80余種，主要分布在熱帶和亞熱帶地區(qū)。中國是世界兜蘭屬植物最為豐富的國家，總種類達(dá)到27個種，主要分布于西南和南部的熱帶與亞熱帶南緣地區(qū)，以云南、廣西、貴州分布最多。

杏黃兜蘭(Paphiopedilumarmeniacum)是兜蘭屬最具觀賞價值的種類之一，花單生，金黃色，花瓣大，唇瓣囊狀，常稱之為“金兜”，曾多次獲國際花展和蘭展金獎和一級證書等最高獎，和硬葉兜蘭一起被譽為兜蘭屬的“金童玉女”。近年來，由于市場對于杏黃兜蘭的需求日益增加，野外資源近乎瀕危，進行產(chǎn)業(yè)化栽培生產(chǎn)已經(jīng)成為滿足市場需求的重要途徑。

在兜蘭生長發(fā)育過程中，氮素營養(yǎng)一直是調(diào)節(jié)植物生長的重要營養(yǎng)之一。氮是植物生長的“生命元素”，其參與植物細(xì)胞、組織和器官的構(gòu)建，也是合成具有生物活性的蛋白質(zhì)——酶的主要物質(zhì)來源，還影響著植物的葉綠素合成、光合作用及酶的調(diào)節(jié)等重要生命過程。在植物組織培養(yǎng)中，植物培養(yǎng)基由大量元素、微量元素和有機元素及碳源組成，而在大量元素中最重要的是氮素營養(yǎng)。通常不同的培養(yǎng)基中所用的氮素營養(yǎng)不同，如MS培養(yǎng)基中所用的為硝酸鉀、硝酸銨，B5培養(yǎng)基的氮源為硝酸鉀，硫酸銨，而Harvais培養(yǎng)基則是使用硝酸鉀，硝酸銨及四水硝酸鈣做為氮源，對于植物生長，不同的氮源(硝態(tài)氮，銨態(tài)氮)及濃度都會影響植物組培苗的生長和發(fā)育。

杏黃兜蘭的種子微小且無胚乳，無法為胚的發(fā)育提供足夠的營養(yǎng)，在野外條件下，需要共生真菌提供營養(yǎng)幫助其萌發(fā)。目前人工繁育方法主要是利用培養(yǎng)基提供營養(yǎng)進行種子無菌萌發(fā)，來繁育幼苗，但這一過程還存在著生長慢，增殖系數(shù)低等問題，需進一步優(yōu)化技術(shù)方案獲得促進無菌苗生長及增殖的方法。

迄今為止，現(xiàn)有技術(shù)中還未見有杏黃兜蘭無菌苗生長、增殖及生根最合適的氮源及氮素濃度的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足之處，提供一種促進杏黃兜蘭無菌苗生長及增殖的方法。通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的氮源及濃度，確定了對杏黃兜蘭無菌苗生長、增殖及生根最合適的氮源及氮素濃度的方法，利用此方法可顯著提高杏黃兜蘭無菌苗的繁殖效率，為建立杏黃兜蘭高效人工繁殖技術(shù)體系提供了技術(shù)基礎(chǔ)。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

一種促進杏黃兜蘭無菌苗生長及增殖的方法，在基本培養(yǎng)基中加入不同濃度或不同比例的KNO₃或NH₄NO₃，進行影響無菌苗生長的試驗，通過調(diào)節(jié)不同階段培養(yǎng)基中的氮源類型、濃度和比例，促進杏黃兜蘭無菌苗增殖、生長及生根。

如上的一種促進杏黃兜蘭無菌苗生長及增殖的方法，其中所述的調(diào)節(jié)氮源類型和濃度是指用KNO₃∶NH₄NO₃比例為1∶1，總濃度為60mML^-1，也就是用KNO₃和NH₄NO₃濃度各為30mML^-1的1/2MS培養(yǎng)基促進杏黃兜蘭無菌苗增殖；用KNO₃為氮源，濃度為40mML^-1的1/2MS培養(yǎng)基促進生長較多葉片和較大葉面積；用濃度為0或10mML^-1的KNO₃為氮源的1/2MS培養(yǎng)基促進生根。