[發(fā)明專利]一種離體誘導(dǎo)南高叢越橘四倍體的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510099603.6
• 申請日: 2015-03-06
• 公開（公告）號: CN104737909A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱遠星
• 申請（專利權(quán)）人: 朱遠星
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務(wù)所 45109
• 代理人: 吳安儀

技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物多倍體培育的方法，具體地說，涉及一種離體誘導(dǎo)南高叢越橘四倍體的方法。

背景技術(shù)

越橘屬于杜鵑花科越橘屬多年生落葉或常綠灌木，果實為藍色或紅色，原產(chǎn)北美。果實為藍色或紅色，果實大小因種類不同而異，果肉柔軟多汁，風(fēng)味醇美，含有豐富的維生素和及其他果品中少有的特殊營養(yǎng)成分,具有較高的保健藥用價值，因此國際糧農(nóng)組織將其列為人類五大健康食品之一。

植物染色體數(shù)目加倍后,提高植株基因量進而增強了植物的抗逆性,使植物對外界不良環(huán)境的適應(yīng)能力更強;此外,加倍后的植株發(fā)生了葉片面積增大,葉片氣孔數(shù)目減少,氣孔保衛(wèi)細胞增大,保衛(wèi)細胞中的葉綠體含量增多等變化,提高了植物體的光合效率,有利于植物的生長發(fā)育。因此,植物多倍體誘導(dǎo)育種有著無比廣闊的應(yīng)用前景。而南高叢越橘（Vaccinium?australe）具有抗逆性強、生長速度快、產(chǎn)量高等優(yōu)點，但因果實較小而制約了其推廣種植。開展越橘的多倍體育種,可在此基礎(chǔ)上較快選育出一批高品質(zhì)、高產(chǎn)量、適應(yīng)性增強的新的種質(zhì)資源。因此，本發(fā)明以組培苗莖尖為材料，采用浸漬法與培養(yǎng)基共培養(yǎng)結(jié)合的方法對南高叢越橘組培苗莖尖進行離體四倍體誘導(dǎo)，并獲得了南高叢越橘四倍體再生植株，對培育適應(yīng)熱帶及亞熱帶的大果型越橘新品種具有重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

????本發(fā)明的目的在于提供出一種離體誘導(dǎo)南高叢越橘四倍體的方法，本發(fā)明以組培苗莖尖為材料，采用浸漬法對南高叢越橘組培苗莖尖進行離體四倍體誘導(dǎo)并獲得了南高叢越橘四倍體再生植株，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。

?本發(fā)明的一種離體誘導(dǎo)南高叢越橘四倍體的方法，包括以下的步驟：

（1）增殖培養(yǎng)：將生長健壯的南高叢越橘組培苗莖尖剪切并接種到繼代培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)。接種后先在25～28℃條件下全暗培養(yǎng)2～5天，然后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養(yǎng)溫度為25～28℃的條件下培養(yǎng)，每20天繼代一次，以獲得更多的叢生芽。

（2）多倍體誘導(dǎo)：剪取步驟（1）培養(yǎng)獲得的叢生芽帶葉莖尖（約0.5cm），浸泡在經(jīng)過抽濾滅菌的秋水仙素溶液中，在搖床中以100～300r/min的速度震蕩處理12～48h,然后無菌水沖洗3～5次后接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進行多倍體誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后先在25～28℃條件下全暗培養(yǎng)20～30天，然后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養(yǎng)溫度為25～28℃的條件下培養(yǎng)。

（3）嵌合體分離：將步驟（2）獲得的變異植株枝條剪下,進行組織培養(yǎng),將恢復(fù)生長的嵌合體枝條分切成帶芽小段并接種到增殖培養(yǎng)基上分離培養(yǎng),如此重復(fù)切割增殖培養(yǎng)幾代,再進行倍性檢測,直到得到四倍體植株為止。

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3）獲得的經(jīng)形態(tài)鑒定、染色體計數(shù)確認已為四倍體的變異萌枝剪切并接種至生根培養(yǎng)中誘導(dǎo)生根。接種后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養(yǎng)溫度為25～28℃的條件下培養(yǎng)直至生根。

（5）煉苗移栽：根長至1～2cm試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開在室外于自然光照下煉苗2～4天后將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，盡量不傷害根部，栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷＝3：1:1組成基質(zhì)中并定植于大田中，移栽1個月內(nèi)保持空氣濕度80%以上。

????上述步驟（1）、（3）所述的增殖培養(yǎng)基為：WPM+0.1～2.0mg/L?ZT+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

????上述步驟（2）所述的秋水仙素深夜是指濃度為0.05%～0.2%的秋水仙素溶液。

????上述步驟（2）所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：WPM+0.1～2.0mg/L?ZT+10～30mg/L秋水仙素+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

???上述步驟（4）所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+1.0～3.0mg/L?NAA+1.0～2.0mg/L?ABT₁+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。