[發明專利]一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法

無效

• 申請號: 201510099603.6
• 申請日: 2015-03-06
• 公開（公告）號: CN104737909A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發明（設計）人: 朱遠星
• 申請（專利權）人: 朱遠星
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 吳安儀

技術領域

????本發明涉及農業生物技術中植物多倍體培育的方法，具體地說，涉及一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法。

背景技術

越橘屬于杜鵑花科越橘屬多年生落葉或常綠灌木，果實為藍色或紅色，原產北美。果實為藍色或紅色，果實大小因種類不同而異，果肉柔軟多汁，風味醇美，含有豐富的維生素和及其他果品中少有的特殊營養成分,具有較高的保健藥用價值，因此國際糧農組織將其列為人類五大健康食品之一。

植物染色體數目加倍后,提高植株基因量進而增強了植物的抗逆性,使植物對外界不良環境的適應能力更強;此外,加倍后的植株發生了葉片面積增大,葉片氣孔數目減少,氣孔保衛細胞增大,保衛細胞中的葉綠體含量增多等變化,提高了植物體的光合效率,有利于植物的生長發育。因此,植物多倍體誘導育種有著無比廣闊的應用前景。而南高叢越橘（Vaccinium?australe）具有抗逆性強、生長速度快、產量高等優點，但因果實較小而制約了其推廣種植。開展越橘的多倍體育種,可在此基礎上較快選育出一批高品質、高產量、適應性增強的新的種質資源。因此，本發明以組培苗莖尖為材料，采用浸漬法與培養基共培養結合的方法對南高叢越橘組培苗莖尖進行離體四倍體誘導，并獲得了南高叢越橘四倍體再生植株，對培育適應熱帶及亞熱帶的大果型越橘新品種具有重要的現實意義。

發明內容

????本發明的目的在于提供出一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法，本發明以組培苗莖尖為材料，采用浸漬法對南高叢越橘組培苗莖尖進行離體四倍體誘導并獲得了南高叢越橘四倍體再生植株，從而實現了本發明的目的。

?本發明的一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法，包括以下的步驟：

（1）增殖培養：將生長健壯的南高叢越橘組培苗莖尖剪切并接種到繼代培養基中進行增殖培養。接種后先在25～28℃條件下全暗培養2～5天，然后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養，每20天繼代一次，以獲得更多的叢生芽。

（2）多倍體誘導：剪取步驟（1）培養獲得的叢生芽帶葉莖尖（約0.5cm），浸泡在經過抽濾滅菌的秋水仙素溶液中，在搖床中以100～300r/min的速度震蕩處理12～48h,然后無菌水沖洗3～5次后接種至誘導培養基中進行多倍體誘導培養。接種后先在25～28℃條件下全暗培養20～30天，然后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養。

（3）嵌合體分離：將步驟（2）獲得的變異植株枝條剪下,進行組織培養,將恢復生長的嵌合體枝條分切成帶芽小段并接種到增殖培養基上分離培養,如此重復切割增殖培養幾代,再進行倍性檢測,直到得到四倍體植株為止。

（4）生根培養：將步驟（3）獲得的經形態鑒定、染色體計數確認已為四倍體的變異萌枝剪切并接種至生根培養中誘導生根。接種后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養直至生根。

（5）煉苗移栽：根長至1～2cm試管苗的培養瓶瓶蓋打開在室外于自然光照下煉苗2～4天后將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，盡量不傷害根部，栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷＝3：1:1組成基質中并定植于大田中，移栽1個月內保持空氣濕度80%以上。

????上述步驟（1）、（3）所述的增殖培養基為：WPM+0.1～2.0mg/L?ZT+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

????上述步驟（2）所述的秋水仙素深夜是指濃度為0.05%～0.2%的秋水仙素溶液。

????上述步驟（2）所述的誘導培養基為：WPM+0.1～2.0mg/L?ZT+10～30mg/L秋水仙素+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

???上述步驟（4）所述的生根培養基為：1/2MS+1.0～3.0mg/L?NAA+1.0～2.0mg/L?ABT₁+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。