[發明專利]一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法

無效

• 申請號: 201510099603.6
• 申請日: 2015-03-06
• 公開（公告）號: CN104737909A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發明（設計）人: 朱遠星
• 申請（專利權）人: 朱遠星
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 吳安儀

1.一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）增殖培養：將生長健壯的南高叢越橘組培苗莖尖剪切并接種到繼代培養基中進行增殖培養,接種后先在25～28℃條件下全暗培養2～5天，然后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養，每20天繼代一次，以獲得更多的叢生芽；

（2）多倍體誘導：剪取步驟（1）培養獲得的叢生芽帶葉莖尖（約0.5cm），浸泡在經過抽濾滅菌的秋水仙素溶液中，在搖床中以100～300r/min的速度震蕩處理12～48h,然后無菌水沖洗3～5次后接種至誘導培養基中進行多倍體誘導培養,接種后先在25～28℃條件下全暗培養20～30天，然后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養；

（3）嵌合體分離：將步驟（2）獲得的變異植株枝條剪下,進行組織培養,將恢復生長的嵌合體枝條分切成帶芽小段并接種到增殖培養基上分離培養,如此重復切割增殖培養幾代,再進行倍性檢測,直到得到四倍體植株為止；

（4）生根培養：將步驟（3）獲得的經形態鑒定、染色體計數確認已為四倍體的變異萌枝剪切并接種至生根培養中誘導生根,接種后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養直至生根；

（5）煉苗移栽：根長至1～2cm試管苗的培養瓶瓶蓋打開在室外于自然光照下煉苗2～4天后將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，盡量不傷害根部，栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷＝3：1:1組成基質中并定植于大田中，移栽1個月內保持空氣濕度80%以上。

2.????根據權利要求1所述的一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法，其特征在于步驟（1）、（3）所述的增殖培養基為：WPM+0.1～2.0mg/L?ZT+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

3.根據權利要求1所述的一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法，其特征在于步驟（2）所述的秋水仙素深夜是指濃度為0.05%～0.2%的秋水仙素溶液。

4.根據權利要求1所述的一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法，其特征在于步驟（2）所述的誘導培養基為：WPM+0.1～2.0mg/L?ZT+10～30mg/L秋水仙素+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

5.???根據權利要求1所述的一種離體誘導南高叢越橘四倍體的方法，其特征在于步驟（4）所述的生根培養基為：1/2MS+1.0～3.0mg/L?NAA+1.0～2.0mg/L?ABT₁+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。