[發明專利]一種皮質抑素生長抑素雙表達DNA疫苗及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201510097328.4
• 申請日: 2015-03-05
• 公開（公告）號: CN104673735B
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 楊利國;羅璇;梁愛心;韓麗;董方曉;淡新鋼
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/66;A61K48/00;A61K39/108;A61P3/00;C12R1/19
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種促進動物生長的DNA疫苗菌株，所述的菌株為大腸桿菌(Escherichia coli)DH5a(p IRES-S/CST14-S/2SS)，保藏編號：CCTCC NO：M2014583。

2.權利要求1所述菌株包含的皮質抑素生長抑素雙表達的DNA質粒。

3.權利要求2所述質粒的制備方法：

1)根據cortistatin Mus musculus基因序列GenBank NM_007745.3，合成cortistatin-14的cDNA序列其兩端的酶切位點為NdeⅠ和EcoRⅠ，獲得CST14片段；以含Hepatitis B virus strain Huashan乙肝表面抗原片段GenBank EU926424的質粒pVAX1-S為載體，通過堿基合成方法將CST14片段克隆到乙肝表面抗原5'端后酶切位點NdeⅠ，獲得能夠表達皮質抑素14肽融合乙肝表面抗原質粒pVAX1-S/CST14；

所述的質粒pVAX1-S為將S片段GenBank EU926424插入到pVAX1質粒得到；

2)將pVAX1-S/CST14和pIRES兩個質粒進行NheⅠ和EcoRⅠ酶切，連接，獲得質粒pIRES－S/CST14；

3)利用PCS/2SS質粒通過PCR克隆獲得生長抑素融合基因片段S/2SS，上下游引物為：

P1：5’-ATAAGAATGCGGCCGCAATTCCCTGCGCTGAACATG-3’；

P2：5’-GCGTCGACCTTCTGAGATGAGTTTTTGTTCTAC-3’；

4)S/2SS基因片段和真核表達質粒載體pIRES－S/CST14進行NotⅠ和SalⅠ雙酶切，連接，即獲得皮質抑素生長抑素雙表達DNA質粒pIRES-S/CST14-S/2SS。

4.權利要求1所述菌株或權利要求2所述質粒在制備促進動物生長DNA疫苗中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，所述的動物為小鼠。