[發(fā)明專利]人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子突變體、生產(chǎn)方法及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510095072.3
• 申請(qǐng)日: 2015-03-03
• 公開（公告）號(hào): CN104650215B
• 公開（公告）日: 2018-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡海峰;黃芝英;劉英;秦李娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院
• 主分類號(hào): C07K14/475
• 分類號(hào): C07K14/475;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/18;A61P3/04
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所31283
• 代理人: 朱水平,沈利

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物領(lǐng)域，具體涉及一種人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子突變體、生產(chǎn)方法及用途。

背景技術(shù)

人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)是一種多功能的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。它在體內(nèi)具有多種生物學(xué)活性，主要作用于神經(jīng)系統(tǒng)，對(duì)中樞和外周的多種神經(jīng)元有廣泛的促存活作用。人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中能夠促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖，抑制神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的分化。此外，它對(duì)感覺神經(jīng)元、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元、海馬膽堿能神經(jīng)元等具有促進(jìn)存活的作用，并能夠保護(hù)受損的神經(jīng)元。

當(dāng)前，肥胖癥與肥胖相關(guān)糖尿病已成為國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活方式的改變，肥胖、糖尿病的發(fā)生率明顯上升。市場(chǎng)上出現(xiàn)了多種減肥產(chǎn)品，但絕大多數(shù)產(chǎn)品的功效不盡如人意。近年來(lái)，在對(duì)CNTF動(dòng)物模型及功能研究時(shí)發(fā)現(xiàn)其具有減輕體重的作用，在多種嚙齒動(dòng)物肥胖癥或Ⅱ型糖尿病模型試驗(yàn)中表明CNTF可使體重減輕，如中國(guó)專利CN101144082B(授權(quán)公告日2012年9月5日)

公開了用CNTF突變體治療肥胖癥。CNTF給藥可糾正或改善高胰島素血癥、食欲過盛以及高血脂等與肥胖有關(guān)的疾病或癥狀，但是人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的使體重減輕的生物學(xué)活性較低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，克服現(xiàn)有人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)使體重減輕的活性較低的缺陷，提供一種人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子突變體、生產(chǎn)方法及用途，所述人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子突變體具有良好的穩(wěn)定性和減重效果。

本發(fā)明的技術(shù)方案之一是：一種人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子突變體，其是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)：

(a)將人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的氨基酸序列的第17位的半胱氨酸殘基取代為丙氨酸殘基、第63位的谷氨酸殘基取代為精氨酸殘基、第186位的異亮氨酸殘基進(jìn)行取代和截短C末端14個(gè)氨基酸殘基而形成的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(b)如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)、如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)或如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)。

其中，本發(fā)明所述蛋白質(zhì)(2)中，所述的人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子來(lái)源于人的外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(其基因的Genebank登錄號(hào)為NM_000614.3)，所述人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體獲得的方法為本領(lǐng)域常規(guī)；較佳地，為分離獲得、從重組表達(dá)所述人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的轉(zhuǎn)化體中分離獲得或者人工合成獲得。

本發(fā)明所述蛋白質(zhì)(b)中，如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)為將(a)所述的蛋白質(zhì)的氨基酸序列的第186位的異亮氨酸殘基取代為谷氨酰胺殘基而形成的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，命名為CNTF-186Q，為本發(fā)明最優(yōu)選的CNTF突變體。

本發(fā)明所述蛋白質(zhì)(b)中，如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)為將(a)所述的蛋白質(zhì)的氨基酸序列的第186位的異亮氨酸殘基取代為精氨酸殘基而形成的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，命名為CNTF-186R。

本發(fā)明所述蛋白質(zhì)(b)中，如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)為將(a)所述的蛋白質(zhì)的氨基酸序列的第186位的異亮氨酸殘基取代為色氨酸殘基而形成的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)，命名為CNTF-186W。

本發(fā)明的技術(shù)方案之二是：一種人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的基因，其

(1)編碼將人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的氨基酸序列的第17位的半胱氨酸殘基取代為丙氨酸殘基、第63位的谷氨酸殘基取代為精氨酸殘基、第186位的異亮氨酸殘基進(jìn)行取代和截短C末端14個(gè)氨基酸殘基而形成的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；或，

(2)編碼如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)、如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)或如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)。