[發(fā)明專利]人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子突變體、生產(chǎn)方法及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510095072.3
• 申請(qǐng)日: 2015-03-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104650215B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡海峰;黃芝英;劉英;秦李娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院
• 主分類號(hào): C07K14/475
• 分類號(hào): C07K14/475;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/18;A61P3/04
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所31283
• 代理人: 朱水平,沈利

1.一種人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子突變體，其特征在于，是如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)。

2.一種人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的基因，其特征在于，其

編碼如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)。

3.如權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于，所述的編碼如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一種包含如權(quán)利要求2所述的人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的基因的重組載體。

5.一種包含如權(quán)利要求4所述的重組載體的轉(zhuǎn)化體。

6.如權(quán)利要求5所述的轉(zhuǎn)化體，其特征在于，所述的轉(zhuǎn)化體的宿主微生物為E.coli BL21。

7.一種人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：培養(yǎng)如權(quán)利要求5所述的轉(zhuǎn)化體，從培養(yǎng)液中獲得人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體。

8.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)的方法包括以下的步驟：將所述轉(zhuǎn)化體接種至培養(yǎng)基中培養(yǎng)，加入異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，獲得培養(yǎng)液；所述的從培養(yǎng)液中獲得人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的方法包括以下的步驟：離心收集所述培養(yǎng)液中的菌體，重懸菌體，高壓均質(zhì)破碎菌體，離心收集包涵體，將所述包涵體用含鹽酸胍緩沖液溶解變性，得到包涵體變性液，通過(guò)稀釋復(fù)性方法將包涵體蛋白復(fù)性，用切線流系統(tǒng)進(jìn)行濃縮后再用置換緩沖液進(jìn)行透析置換得到所述人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的粗品，所述置換緩沖液包括50mMTris-HCL和1mM EDTA，pH8.0，所述切線流系統(tǒng)為購(gòu)自Millipore的Labscale TFF System；和/或，還包括從所述的粗品中獲得所述人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的步驟：將所述人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的粗品用陰離子交換柱進(jìn)行層析純化，再將目的蛋白人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體用疏水層析柱進(jìn)行精細(xì)純化，收集目的蛋白峰，經(jīng)濾膜過(guò)濾除菌后，得到人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體的純品。

9.一種如權(quán)利要求1所述的人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的突變體在制備治療肥胖癥藥物中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的肥胖癥為普通肥胖癥或者糖尿病型肥胖癥。