[發明專利]一種蜈蚣蛆蟲蛋白質在制備抗食道癌藥品中的應用

在審

• 申請號: 201510092236.7
• 申請日: 2015-03-02
• 公開（公告）號: CN104623620A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 徐華民;趙榮華
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: A61K38/00
• 分類號: A61K38/00;A61K35/64;A61P35/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;A61K35/648
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 高媛

技術領域

本發明涉及一種藥品的新用途，尤其是一種蜈蚣蛆蟲蛋白質在制備抗食道癌藥品中的應用。

背景技術

食道癌是由于暴怒憂思、傷及肝脾，脾傷則氣結，氣結則津液不能輸流，阻而成痰，肝傷則氣郁，氣郁則血液不能暢行，遂而為瘀，瘀痰阻塞食道，結聚胃腑，故食物難于下行，或由外因飲食不節，長期刺激食道而引起的病癥。

CN93104343公開了治療食管癌的中成藥，由砒石、斑蝥、蟾蜍、蛇毒、蜈蚣水蛭、蝎尾、守宮、牛黃、人參等14種中藥組成；CN1475233公開了一種治療食道癌中藥粉末的制備方法，由珍珠、牛黃、冰片、薏苡仁、月石、小皂角、白礬、冬蟲夏草、陳皮等11種中藥組成；CN101129607A公開了一種治療食管癌患者化療后免疫功能損傷的中藥空腹也，由人參、黃芪、冬蟲夏草、白術、茯苓、甘草、當歸、枸杞子等中藥草組成；CN100391525公開了一種治療食道癌的中藥，由山慈菇、紫河車、半枝蓮、金銀花、蜈蚣、全蝎、地龍、人參、三期、靈芝、甘草等16種中藥組成。

201210178608.4公開了人工培殖蜈蚣蛆蟲的方法，該發明以蜈蚣等為原料，經多步驟定向培殖蜈蚣蛆蟲，培殖過程可控，適合工業化生產，培殖的蜈蚣蛆蟲消除了蜈蚣具有的毒性，該蟲體機體成分具有較高的生物活性。

上述由原植物組成的中藥制劑都可以用于抗食管癌藥品制備，但是由于前述的幾個藥方中藥物繁多，每種中草藥由于種植區域、氣候、品種、采收時間、炮制及加工方法的差異，在工業化生產中難于保證產品的一致性，也難于控制質量。

發明內容

本發明的目的是提供一種蜈蚣蛆蟲蛋白質在制備抗食道癌藥品中的應用，采用蜈蚣蛆蟲為原料，通過一系列的工藝條件分離純化成為蜈蚣蛆蟲蛋白質，制備成四項給藥系統，具有藥效高、一致性好的特點。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

（1）將1000g蜈蚣蛆蟲在常溫膨化裝置（200520108339.X）中常溫條件下膨化粉碎。

本步驟中，所述膨化壓力為0.1~5MPa，時間為10~60min。

（2）膨化粉碎后的物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076.6）中，加入膨脹溶劑并加壓至2~10MPa，形成膨脹溶劑體系，提取出蜈蚣蛆蟲蛋白質粗品。

本步驟中，所述膨脹溶劑由1~10Kg液態二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH₃·H₂O組成或由1~10Kg液態二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化銨組成。

本步驟中，所述提取溫度為10~20℃，時間為10~30min。

（3）收集含有蜈蚣蛆蟲蛋白質粗品的溶液并且用微孔過濾器過濾去掉雜質。

本步驟中，所述微孔過濾器的孔徑為0.5~50μm。

（4）用超濾機超濾處理，收集含有相應分子量的蜈蚣蛆蟲蛋白質超濾溶液。

本步驟中，所述超濾機的孔徑為50~100nm。

（5）超濾液溶解在適宜的溶劑中用固相萃取柱分離，收集洗脫成分。

本步驟中，所述溶劑為乙腈。

（6）將洗脫成分溶解在合適的溶劑體系中，用超聲駐波液相制備色譜（200920274485.8）分離純化。

本步驟中，所述溶劑體系由正丁醇-乙酸乙酯-水（體積比1.25:3.75:5）組成或4.5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500（重量比）組成。

（7）純化后的蜈蚣蛆蟲蛋白質用真空冷凍干燥機制備成凍干蛋白粉。

本步驟中，所述真空冷凍干燥溫度為-30~50℃、時間為18~26h。

（8）賦予不同的藥用輔助材料，分別制備成注射劑、口服靶向給藥系統等，可用于制備抗食道癌藥品。

本技術方案中分離的純化蜈蚣蛆蟲蛋白質經聚丙烯酰胺凝膠電泳、雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳及瓊脂聚糖免疫電泳譜上測得非均一蛋白質；用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法及葡聚糖凝膠G-75凝膠過濾法測得相對分子量為10.6~11.8KPa；用等電聚焦發測定其等電點為pH8.9~9.6；常規化學法分析結果表明其不含糖基；紫外分光光度法測定純化的蜈蚣蛆蟲蛋白質含量為98.2%。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明的技術方案作進一步的說明，但并不局限如此，凡是對本發明技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的精神和范圍，均應涵蓋在本發明的保護范圍中。

實施例1：