[發明專利]蜈蚣蛆蟲蛋白質的制備方法及其在制備抗甲狀腺癌藥品中的應用

在審

• 申請號: 201510092201.3
• 申請日: 2015-03-02
• 公開（公告）號: CN104628815A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 徐華民;趙榮華
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;A61K38/00;A61K9/12;A61K9/127;A61K9/06;A61K9/48;A61P35/00;A61K35/648
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 高媛

技術領域

本發明涉及一種藥物的制備方法及其新用途，尤其是蜈蚣蛆蟲蛋白質的制備方法及其在制備抗甲狀腺癌藥品中的應用。

背景技術

甲狀腺癌是發生于甲狀腺體的惡性腫瘤。甲狀腺癌發生的原因一般為放射性損傷、碘的缺乏或過量引起的甲狀腺結構和功能的變化，或者某些甲狀腺病變以及家族遺傳因素。

現代分子生物學研究表明，甲狀腺癌與多種病毒、多種癌基因、癌基因轉移有一定的關聯性。

現在對甲狀腺癌治療常用外科手術治療、放射治療、化學藥物治療。中醫治療則對癥分別采用清熱解毒、散結消癭、理氣化痰、散瘀破結等方法治療。

CN103122390A公開了FRAT1基因作為檢測甲狀腺癌的血清標志物及其應用，該發明涉及FRAT1基因的甲基化作為檢測甲狀腺癌的標志物，將OXTR基因與FRAT1基因聯用能更好的作為檢測甲狀腺癌的標志物。

CN102319234A公開了姜黃素在制備甲狀腺癌治療劑中的應用，姜黃素特異性殺傷甲狀腺癌細胞，但對正常甲狀腺細胞影響較小，能促進甲狀腺癌細胞的凋亡。

CN103038636公開了用于診斷病狀的方法和組合物，該發明涉及用于診斷甲狀腺癌和其他癌癥的分子譜分析的組合物、試劑盒和方法。

CN101068933A公開了用于腫瘤細胞增生轉導的纖維修飾的腺病毒載體。該發明提供一種有效傳到原發腫瘤細胞的腺病毒載體，該載體包括嵌合腺病毒纖維蛋白直，其中包括亞型C腺病毒纖維軸的一部分及頭區結合CD46的亞型B腺病毒或者血清型37腺病毒頭的一部分。

CN103866039A公開了人類甲狀腺癌組織基因特異位點甲基化水平檢測引物及應用，該發明涉及人類甲狀腺癌組織基因。所述檢測物的序列包括上游擴增引物序列、生物素修飾下游擴增引物序列、焦磷酸測序引物序列。

中藥蜈蚣為蜈蚣科動物少棘蜈蚣和多棘蜈蚣的蟲體，性溫，味辛，有毒，歸肝經。

蜈蚣全蟲含兩種類似蜂毒的有毒成分，即組胺樣物質及溶血性蛋白質。

201210178608.4公開了人工培殖蜈蚣蛆蟲的工藝，該發明以蜈蚣等原料作為培養基，經過培殖、培養、加工成為具有生物活性的蟲體。該過程經過基因重組消除了有毒成分，制備成為抗甲狀腺癌的藥物原料。

發明內容

本發明的目的是提供一種蜈蚣蛆蟲蛋白質的制備方法及其在制備抗甲狀腺癌藥品中的應用，利用蜈蚣蛆蟲為原料，經過分離純化蛋白質，再用此蛋白質制備各種劑型的藥品，本過程工藝簡要明了，藥品成分明確，一致性好，療效明顯。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

（1）將1000g蜈蚣蛆蟲在常溫膨化裝置（200520108339.X）中常溫條件下膨化粉碎。

本步驟中，所述膨化壓力為0.1~5MPa，時間為10~60min。

（2）膨化粉碎后的物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076.6）中，加入膨脹溶劑并加壓至2~10MPa，形成膨脹溶劑體系，提取出蜈蚣蛆蟲蛋白質粗品。

本步驟中，所述膨脹溶劑由1~10Kg液態二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH₃·H₂O組成或由1~10Kg液態二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化銨組成。

本步驟中，所述提取溫度為10~20℃，時間為10~30min。

（3）收集含有蜈蚣蛆蟲蛋白質粗品的溶液并且用微孔過濾器過濾去掉雜質。

本步驟中，所述微孔過濾器的孔徑為0.5~50μm。

（4）用超濾機超濾處理，收集含有相應分子量的蜈蚣蛆蟲蛋白質超濾溶液。

本步驟中，所述超濾機的孔徑為50~100nm。

（5）超濾液溶解在適宜的溶劑中用固相萃取柱分離，收集洗脫成分。

本步驟中，所述溶劑為乙腈。

（6）將洗脫成分溶解在合適的溶劑體系中，用超聲駐波液相制備色譜（200920274485.8）分離純化。

本步驟中，所述溶劑體系由正丁醇-乙酸乙酯-水（體積比1.25:3.75:5）組成或4.5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500（重量比）組成。

（7）純化后的蜈蚣蛆蟲蛋白質用真空冷凍干燥機制備成凍干蛋白粉。

本步驟中，所述真空冷凍干燥溫度為-30~50℃、時間為18~26h。

（8）賦予不同的藥用輔助材料，分別制備成注射劑、口服劑等，可用于制備抗甲狀腺癌藥品。