[發明專利]蜈蚣蛆蟲蛋白質的制備方法及其在制備抗甲狀腺癌藥品中的應用

在審

• 申請號: 201510092201.3
• 申請日: 2015-03-02
• 公開（公告）號: CN104628815A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 徐華民;趙榮華
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;A61K38/00;A61K9/12;A61K9/127;A61K9/06;A61K9/48;A61P35/00;A61K35/648
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 高媛

1.一種蜈蚣蛆蟲蛋白質的制備方法，其特征在于所述制備方法步驟如下：

（1）將1000g蜈蚣蛆蟲在常溫膨化裝置中常溫條件下膨化粉碎；

（2）膨化粉碎后的物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置中，加入由1~10Kg液態二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH₃·H₂O組成或由1~10Kg液態二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化銨組成的膨脹溶劑并加壓至2~10MPa，形成膨脹溶劑體系，提取出蜈蚣蛆蟲蛋白質粗品；

（3）收集含有蜈蚣蛆蟲蛋白質粗品的溶液并且用微孔過濾器過濾去掉雜質；

（4）用超濾機超濾處理，收集蜈蚣蛆蟲蛋白質超濾溶液；

（5）超濾液溶解在乙腈中用固相萃取柱分離，收集洗脫成分；

（6）將洗脫成分溶解在由正丁醇-乙酸乙酯-水按體積比1.25:3.75:5組成或由聚乙二醇-葡聚糖T500按重量比4.5:7組成的溶劑體系中，用超聲駐波液相制備色譜分離純化；

（7）純化后的蜈蚣蛆蟲蛋白質用真空冷凍干燥機制備成凍干蛋白粉。

2.根據權利要求1所述的蜈蚣蛆蟲蛋白質的制備方法，其特征在于所述膨化壓力為0.1~5MPa，時間為10~60min。

3.根據權利要求1所述的蜈蚣蛆蟲蛋白質的制備方法，其特征在于所述提取溫度為10~20℃，時間為10~30min。

4.根據權利要求1所述的蜈蚣蛆蟲蛋白質的制備方法，其特征在于所述微孔過濾器的孔徑為0.5~50μm，超濾機的孔徑為50~100nm。

5.根據權利要求1所述的蜈蚣蛆蟲蛋白質的制備方法，其特征在于所述真空冷凍干燥溫度為-30~50℃、時間為18~26h。

6.權利要求1-5任一所述方法制備的蜈蚣蛆蟲蛋白質在制備抗甲狀腺癌藥品中的應用。

7.根據權利要求6所述的蜈蚣蛆蟲蛋白質在制備抗甲狀腺癌藥品中的應用，其特征在于所述抗甲狀腺癌藥品的劑型為脂質體注射劑，制備方法如下：

（1）1mol磷脂酰絲氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后，加入1000~3000L生理鹽水水合處理，再用超聲波在頻率500~2000KHz、功率0.01~5KW處理1~5min；

（2）取上述溶液1~100mL加入到含量0.001~0.01mol/L的0.1~1000mLCaCl₂溶液中，在轉速30~75r/min條件下攪拌10~30min，然后在25~50℃條件下靜置30~120min；

（3）將生成物放置離心機中，在轉速1500~3000r/min離心分離5~30min，將離心物從離心機中取出后加入2~50g蜈蚣蛆蟲蛋白質混合均勻，在10~25℃條件下靜置10~120min；

（4）上述物體加入含有0.01~10mol/L的乙二胺四乙酸的生理鹽水溶液0.1~10L中，混合均勻靜置30~180min，得到單層脂質體；

（5）取1~10mg單層脂質體與10~200mL生理鹽水溶液混合，制備成為注射劑。

8.根據權利要求6所述的蜈蚣蛆蟲蛋白質在制備抗甲狀腺癌藥品中的應用，其特征在于所述抗甲狀腺癌藥品的劑型為腸溶膠囊，制備方法如下：

取10~100g蜈蚣蛆蟲蛋白質、500~2000g預凝膠淀粉及5-50g乳糖充分混合，填充入羥丙基甲基纖維素腸溶膠囊中，制備成為蜈蚣蛆蟲蛋白質腸溶膠囊。

9.根據權利要求6所述的蜈蚣蛆蟲蛋白質在制備抗甲狀腺癌藥品中的應用，其特征在于所述抗甲狀腺癌藥品的劑型為氣霧劑，制備方法如下：

將10~20g蜈蚣蛆蟲蛋白質粉碎至2~5μm，用50~70%乙醇溶解均勻定溶于300mL，再加入聚乙二醇（200）單月桂酸酯0.2~0.5g溶解均勻，在不斷攪拌條件下定量分裝于100瓶氣霧劑耐壓瓶內，壓蓋后在800~1000KPa壓力下向瓶內壓入3~5g二氯二氟甲烷，即成為蜈蚣蛆蟲蛋白質氣霧劑。

10.根據權利要求6所述的蜈蚣蛆蟲蛋白質在制備抗甲狀腺癌藥品中的應用，其特征在于所述抗甲狀腺癌藥品的劑型為外用軟膏劑，制備方法如下：

取100~200g蜈蚣蛆蟲蛋白質置于滅菌研磨機中，加入預先用150~200℃干熱滅菌30~90min并放冷到室溫的20~50g液體石蠟，研磨成膏狀，再加入預先用120~160℃干熱滅菌60~90min并放冷的20~50g凡士林研勻，灌入軟管中即得成品。